芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡及p38MAPK的影响

摘要

目的:研究芍药苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其对缺血区神经细胞凋亡及p38MAPK的影响，拓展该药的研究和应用范围，为其临床预防和治疗脑血管疾病提供实验基础和理论依据。
　　方法:通过线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型模拟局灶性脑缺血再灌注损伤。将健康SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、尼莫地平组、芍药苷组、SB203580组、SB203580+芍药苷组。大鼠于MCAO前半小时腹腔注射生理盐水或药物，缺血1.5小时再灌注24小时。用神经行为学评分评价大鼠脑缺血再灌注后行为障碍，用2，3，5一三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定梗死灶体积，用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡。用Western blotting法及免疫组化法检测p-p38， iNOS以及Fas和TNF-α的表达改变。
　　结果:1.神经行为学评分:各用药组再灌注24h时神经功能缺损情况明显轻于缺血再灌注组，神经功能缺失症状改善，缺血再灌注组与各用药组比较经统计学分析有显著性差异，有统计学意义(P<0.01)。2.再灌注24hTTC染色，各用药组能显著缩小 MCAO大鼠的梗死体积，降低梗塞率，减轻神经细胞损伤程度，改善脑功能。3.TUNEL法检测结果：假手术组脑组织中可见个别散在凋亡细胞，缺血再灌注组可见较多散在凋亡细胞，TUNEL染色阳性；各用药组阳性细胞较缺血再灌注组明显减少，其中SB203580+芍药苷组与其它用药组相比有统计学意义(P<0.01)。4．免疫组化法观察FAS和TNF-α蛋白的表达：与假手术组相比，缺血再灌注组大鼠缺血侧脑组织 FAS和 TNF-α蛋白的表达增多(P<0.01)。与缺血再灌注组比较，其余五组大鼠在药物作用下，发生脑缺血再灌注后的FAS、TNF-α蛋白表达均有明显差异（P<0.01）。芍药苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织FAS、TNF-α蛋白的表达均有下调作用。5．蛋白免疫印迹分析：大鼠脑缺血再灌注后脑组织磷酸化p38蛋白和iNOS蛋白表达明显增加，注射芍药苷和SB203580后p38蛋白磷酸化被抑制，iNOS蛋白表达下调(P<0.05)。
　　结论:1.芍药苷可明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能，缩小脑梗的区域，降低梗死率。
　　2．芍药苷可抑制脑缺血再灌注损伤所引发的神经细胞的凋亡，具有神经保护作用。
　　3．芍药苷通过抑制脑缺血再灌注损伤后p38MAPK信号通路的激活，下调FAS，iNOS和TNF-α的表达产生抑制神经细胞的凋亡的作用。

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引言

材 料 与 方 法

1．材料和仪器

2．实验方法

3 统计学方法

实 验 结 果

1．芍药苷对缺血再灌注后神经行为学评分的影响

2．芍药苷对大鼠缺血再灌注后脑梗死率的影响

3. 芍药苷对缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

4.芍药苷对缺血再灌注后Fas表达的影响

5．芍药苷对缺血再灌注后TNF-α表达的影响

6. 芍药苷对缺血再灌注后p-p38蛋白的影响

7.芍药苷对缺血再灌注损伤后iNOS蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

附录A英文缩略词表

附录B在校期间已发表的文章

附录C 综述： p38MAPK与脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡