左归丸对移植雄性骨髓的雌性小鼠肝再生相关基因信号通路的影响

摘要

目的：采用生物信息学方法分析补肾(左归丸)对小鼠骨髓形成肝细胞基因表达谱的影响，探讨相关信号通路的改变，研究补肾生髓成肝的分子信号作用机制。 方法：采用移植雄性骨髓的雌性小鼠模型，雌性BALB/C小鼠随机分为补肾组(左归丸)和模型组，接受9.0Gy<'60>Co源γ射线照射后，经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞，骨髓移植后分别给予左归丸、生理盐水7g/kg.d灌胃，给药6个月后处死动物，取肝组织标本。选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片，提取液氮冻存肝组织的总RNA，利用反转录酶合成掺有荧光标记的cDNA探针，将探针与基因表达谱芯片杂交，筛选样本之间杂交信号比值有差异表达的基因，所得数据用Microsoft Access、Microsoft Excel软件处理以观察实验小鼠肝组织基因表达谱的变化。利用GenBank ID和UniGene数据库将差异表达基因聚类，利用LocusLink数据库采用国际标准的Gene Ontology分类法对聚类的差异表达基因分类，并利用KEGG数据库查询差异表达基因所涉及的信号通路。 结果：实验小鼠在骨髓移植6个月后的肝组织基因表达谱显著不同，补肾组小鼠相对于对照组的差异表达基因有1147条，已知功能基因有533条，其中209条基因涉及70种生物化学通路，如神经活性配体受体反应、MAPK信号通路、Wnt信号通路、细胞因子-细胞因子受体反应、嘌啉代谢、Jak-STAT信号通路、Cadherin介导的细胞黏附、酪氨酸代谢、凋亡、Toll样受体信号通路、氧化磷酸化过程、甘油酯代谢、TGFβ信号通路。在差异表达基因涉及的代谢信号通路中与肝再生相关的信号通路主要有Wnt信号通路、MAPK信号通路、TGFβ信号通路、Jak-STAT信号通路、凋亡、Toil样受体信号通路等，这些通路中Wnt1、EGF、FGF2、FGF16、MAPKK1、E2F、CSF3、Myd88、sFRP1、sFRP5、CSF2受体、CNTF受体、Caspase 12等基因表达上调，MAPK9、Rac1、GSK3、Wnt10a、IL12a、蛋白激酶C Y、Akt2、ActivinA受体等基因表达下调。 结论：补肾(左归丸)促进骨髓形成肝细胞的作用机制可能在于调节肝再生相关信号通路中的基因表达。

目录

论文说明：缩略语

声明

前言

材料和方法

结果

讨论

1.肝再生调控机制探讨

1.1肝再生的细胞生物学特征

1.2肝再生的调控机制

2.中医药调控肝再生的机制探讨

2.1中医药调控肝再生的研究进展

2.2中医药调控肝再生相关研究中存在的问题

3补肾对肝再生相关信号通路的影响

结语

参考文献

综述一　肝再生调控机制的研究进展

综述二　中医药调控肝再生的研究进展

致谢