逍遥散对慢性疲劳综合征小鼠肝细胞氧化应激损伤与凋亡的干预作用

摘要

目的：慢性疲劳综合征(Chronic Fatigue Syndrome，CFS)是一种以原因不明的疲劳为主要表现的症候群，常伴咽痛、头痛、肌肉关节痛等躯体不适及注意力不集中、记忆力减退、睡眠障碍等精神症状，而且体格及实验室检查常无异常表现。CFS的诊断是通过诊断标准和鉴别诊断，并确定没有身体体征或典型的实验室检查异常进行的，虽然对其病因和发病机制的研究取得了一些进展，但至今其病因和病理生理机制仍然不清楚。有研究表明，氧化应激损伤可能参与了CFS的器官损伤。中医理论认为肝郁脾虚是CFS的主要病机，但其分子机制尚需进一步研究． 本课题拟使用束缚加冷水游泳方法复制慢性疲劳综合征小鼠模型，通过观察该模型小鼠肝组织氧化应激损伤及肝细胞存活状态的改变，探讨CFS所致肝损害的分子机制；通过观察逍遥散对CFS所致肝损害的干预作用，探讨传统中药参与调节CFS的具体机制，并为CFS的临床防治提供实验证据。 方法： 1.动物模型的建立与评定：采用束缚+游泳运动的造模方法。先进行3天的适应性游泳，每天1次，每次30min，第4天开始造模，上午束缚，下午进行游泳训练，连续12天。束缚每3天循序加量1次，时间分别为1h、1.5h、2h、2.5h。游泳训练为力竭性训练，在120cm×120cm×80cm的玻璃缸中进行，静水深60cm。通过对模型小鼠一般情况观察及跳台试验、鼠尾悬挂试验成绩确定造模成功。 2.分组及处理：将CFS模型小鼠随机分为4组： (1)模型组，自然恢复，于造模成功后停止上述造模因素，自然饲养条件下观察； (2)逍遥散小剂量组，予以逍遥散灌胃(0.2ml/10g)； (3)逍遥散大剂量组，予以逍遥散灌胃(0.4ml/10g)； (4)维生素C组，予以维生素C灌胃(0.2 ml/10g)；以上每组小鼠各30只。另取30只年龄、性别匹配的小鼠为对照组。各组小鼠灌胃连续7天，每日1次。 3.指标检测：取各组小鼠肝脏，石蜡切片，常规HE染色后在显微镜观察组织结构变化，硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，原位末端脱氧核糖核苷转移酶标记法(TUNEL)测定肝细胞凋亡率。 结果：本试验使用束缚加冷水游泳方法成功复制了CFS小鼠模型。该模型组小鼠肝组织并无明显的病理形态学变化，但其肝组织SOD活性较对照组显著降低(p<0.001)，MDA含量明显增加(p<0.01)，肝细胞凋亡率也有显著升高(p<0.01)；逍遥散大剂量组、小剂量组和维生素C组小鼠肝组织SOD活性升高，MDA含量减少，肝细胞凋亡率显著降低(p<0.01)。 结论：CFS模型小鼠存在有明显的肝组织氧化应激损伤及肝细胞存活状态改变。逍遥散可干预CFS小鼠肝细胞氧化应激损伤，降低肝细胞凋亡率，明显改善CFS的肝损害。

目录

声明

摘要

前言

第一部分理论探讨

1疲劳的产生机理探讨

2慢性疲劳综合征的病机探讨

3肝郁脾虚的机理探讨

4逍遥散的作用机理探讨

参考文献

第二部分实验研究

1慢性疲劳综合征小鼠模型的建立与评定

1.1材料与方法

1.2结果

1.3讨论

2慢性疲劳综合征小鼠肝细胞氧化应激损伤及逍遥散的干预作用

2.1材料与方法

2.2结果(见表3)

2.3讨论

3慢性疲劳综合征小鼠肝细胞凋亡情况及逍遥散的干预作用

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

4结论

参考文献

附图

综述慢性疲劳综合征研究进展

致谢