益气活血方及其拆方对人血管平滑肌细胞增殖的影响

摘要

背景： 自经皮腔内冠状动脉成形术(Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty，PTCA)创立以来，经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous Coronary Intervention，PCI)在冠心病治疗中已具有越来越重要地位。但介入治疗术后部分患者出现的原先扩张的冠状动脉再次狭窄给患者带来巨大经济和心理负担。PTCA术后再狭窄的形成机理主要包括血管弹性回缩、损伤部位血栓形成、新生内膜过度增生及负性血管重构等。血管内膜增生的主要机制为血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)过度增生，而介入治疗后引起的生长因子和细胞因子的分泌是介导VSMC增殖的主要原因，因此，如何抑制VSMC增殖成为近年来心血管内科领域研究的热点．近年来，研究人员对药物涂层支架进行了大量研究，以期减少PTCA术后冠状动脉血管内再狭窄的发生。并且研究人员在近年的研究中也在不断地探索设计新的支架，减低再狭窄发生的可能性。药物涂层支架置入术等新技术的广泛应用逐渐显示出解决其难题的良好前景，但仍然不能完全解决所有支架内再狭窄。此外，费用昂贵、远期疗效、安全性等诸多问题，还有待大规模临床试验证实。近年临床及实验研究发现，中药对VSMC增殖的抑制效果较好，故价格较低廉且应用安全的中药极具研究价值。对于冠心病PCI术后RS诊断，公认仍然属中医“胸痹心痛病”范畴。 目的： 在中医理论为指导下，我们认为再狭窄患者具有“胸痹心痛病史”及“导管外源机械挫伤”耗气伤血的双重特点，起病及病理演变“气虚血瘀”贯穿始终，从而推论“益气活血”治则应在防治再狭窄形成中占有重要地位。针对中医、西医对再狭窄发病机制各自认识特点，我们优化筛选出三味文献报道最多的，具有抑制VSMC增殖、抑制动脉内皮脱落后血管内膜增生、增加冠状动脉血流等多种防治心血管疾病药效作用的“益气活血”中药，组成小复方制剂——益气活血方，观察该方及其拆方(益气方、活血方)对人血管平滑肌细胞体外培养增殖作用，以期探索益气活血方对人VSMC的作用。 方法： 选用人血管平滑肌细胞(hVSMC)，运用血清药理学方法进行细胞培养，以MTT法检测细胞生长状况，以流式细胞仪确定细胞周期分布，观察益气活血方及其拆方的含药血清对人血管平滑肌细胞增殖的影响以及对细胞周期分布的影响．所得数据以单因素方差分析以及t检验进行统计学分析。 结果： (1)MTT结果显示，黄芪组、活血组、益气活血组的吸光度明显低于空白对照组，差异均有极显著性(P<0.01)；而在黄芪组、活血组、益气活血组三组组间比较中，又以活血组的吸光度最低，与其他两组比较，差异亦极显著(P<0.01)．(2)流式细胞仪检测结果表明，与空白对照组相比，黄芪组、活血组、益气活血组G0/G1期细胞所占比例显著升高(P<0.01)，G2/M期细胞仅益气活血组升高较明显(P<0.05)，而合成增殖的S期细胞明显减少。药物组之间的比较结果显示，活血组G0/G1期细胞所占比例最高，S期细胞比例最小，与黄芪组和益气活血组相比，差异有极显著性(P<0.01)。 结论： 益气活血方及其拆方(益气方、活血方)的含药血清均可抑制hVSMC的增殖，且明显抑制细胞DNA合成，使VSMC生长停滞于G0/G1期．且药物组间的比较提示：活血方对VSMC增殖的抑制作用最强。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前 言

1材料和方法

1.1主要试剂

1.2主要仪器

1.3含药血清的制备

1.4实验方法

1.5培养细胞处理

1.6统计学处理

2结果

2.1益气活血方及其拆方对VSMC增殖作用的影响

2.2益气活血方及其拆方对VSMC周期分布的影响

3讨论

3.1血管平滑肌细胞增殖均存在于AS以及RS：发病现状和病理过程

3.2血管平滑肌细胞增殖与PTCA术后再狭窄

3.3中医对VSMC增殖的认识

3.4中药对VSMC增殖作用的研究

3.5本课题组方依据

3.6研究结果分析

3.7研究小结

参考文献

文献综述 经皮冠状动脉腔内成形术术后的VSMC增殖的中医药防治进展

致 谢

附 图