苋菜凝集素基因(ACA)转入甜瓜及其在转基因植物中的表达

摘要

构建了植物表达载体pBCACA,含ACA抗蚜基因,利用竹节花黄班驳病毒CoYMV启动子介导ACA基因的韧皮部特异高效表达,通过根癌土壤农杆菌介导的方法,将植物表达载体pBCACAh r ACA抗蚜基因导入甜瓜,获得了一批抗卡那霉素的转化再生植株.PCR检测结果初步表明ACA基因已整合到甜瓜总DNA中.建立了一套完整的甜瓜遗传转化技术.为了在有限的时间内证明ACA基因的抗蚜效果,该实验在将ACA基因转入甜瓜的同时将其转入了模式植物烟草.转基因烟草的PCR和Western blot分析结果初步表明,ACA基因已整合到植物染色体中并能够有效表达.虫试结果表明,转基因植株对蚜虫密度有明显的抑制作用,平均能抑制蚜虫密度为达65.65﹪.

目录

缩写

1.前言

1.1研究的目的和意义

1.2甜瓜的基因工程研究进展

1.3蚜虫对甜瓜的危害

1.3.1蚜虫传播甜瓜病毒病

1.3.2蚜虫自身取食对甜瓜造成的危害

1.4抗蚜基因简介

1.4.1苏云金杆菌毒蛋白基因(Bt基因)

1.4.2蛋白酶抑制剂基因

1.4.3植物外源凝集素基因

1.4.4其他抗虫基因

1.5植物外源凝集素ACA

2.材料与方法

2.1材料

2.1.1菌株和质粒

2.1.2植物材料

2.1.3测试昆虫

2.1.4主要分子生物学和生物化学试剂

2.1.5培养基

2.1.6常用溶液母液的配制

2.1.7常用溶液的配制

2.2方法

2.2.1 pBCACA植物表达载体的构建

2.2.2农杆菌介导的烟草转化和再生

2.2.3转基因烟草的PCR检测

2.2.4转基因烟草的抗蚜试验

2.2.5转基因烟草Western blot杂交分析

2.2.6农杆菌介导的甜瓜转化和再生

2.2.7转基因甜瓜的PCR分析

2.2.8转基因甜瓜的蚜虫抗性试验

3.结果与分析

3.1植物表达载体pBCACA的构建

3.1.1中间表达载体pBCACA的构建

3.1.2 pBCACA转化农杆菌

3.2 ACA基因转化烟草实验

3.2.1转基因烟草的PCR检测

3.2.2转基因烟草的抗蚜试验

3.2.3转基因烟草的Weston blot检测

3.3甜瓜的转化和再生

3.3.1甜瓜无菌苗的制备

3.3.2甜瓜的转化及培养基条件

3.3.3外植体的选用

3.4转基因甜瓜的PCR检测

3.5转基因甜瓜植株的获得

3.6转基因甜瓜的蚜虫抗性试验

4讨论

5结论

参考文献

致谢