油豆角（Phaseolus vulgaris.L.）主要种质资源亲缘关系的RAPD分析

摘要

该研究通过田间观察实验和分子生物学实验,以27份菜豆品种作为试材,从生物学特征,RAPD分子标记两个方面进行了系统研究和探讨.结果如下:1)田间实验表明,油豆角是食荚菜豆中的优良变异品种群,是以其商品性为目标多年选择、变异的结果.黑龙江省油豆角种质资源丰富,但品种命名存在不系统,无规则的现象.在生物学特征方面,寻找能够在各个生长时期将油豆角从普通菜豆中区别出来的标记性状.实验结果表明,油豆角的花色是一个要深入研究的标记性状.2)在分子生物学实验部分,利用改良的SDS法提取DNA效果较好.利用RNA酶将可能杂质RNA的干扰去掉,仔细操作,获得在常温下可以长期保存的DNA.优化的RAPD扩增体系为:反应总体积25μ1,其中含10倍扩增缓冲液2.5μ1,Mg<'2+>2.5mmol/l,dNTP300μmol/l,引物为0.1mmol/l,基因组DNA为60ng,Taq酶1.5U,其他成分为无菌双蒸水.优化的程序为:94℃预变性10min,94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延长1min,40个循环,72℃延长7min.用筛选出的14个引物对27品种进行了RAPD分析,共获得114条谱带,其中107条为多态带,多态百分率为89.9﹪.以遗传相似度0.690为阈值,经UPGMA聚类分析,可以将油豆角和普通菜豆分为两大类.以0.650为阕值,可以将油豆角和普通菜豆分为七大类.这与地理起源说基本吻合.(3)分子生物学实验阶段发现引物SBSF-5可以将27份实验材料中的25个清晰准确地鉴别出来,具有一定的实用价值和商业前景.

目录

文摘

英文文摘

1引言

1.1研究目的和意义

1.2油豆角生物学特征及形态学

1.3国内外研究现状

1.3.1国内品质性状分析

1.3.2同工酶标记

1.3.3在亲缘关系鉴定中应用的分子标记方法

2材料与方法

2.1试验材料

2.2试验方法

2.2.1生物学特性

2.2.2 RAPD标记

3结果与分析

3.1形态学及生物学特性研究

3.1.1植株类型调查

3.1.2出苗期调查

3.1.3花期调查

3.1.4花色与荚果性状关系的研究

3.2 RAPD标记

3.2.1 DNA的提取

3.2.2 PCR最优化反应条件的研究

3.2.3随机引物筛选的结果

4讨论

4.1生物学特性

4.2 RAPD标记

4.2.1 RAPD可靠性的研究

4.2.2 DNA的提取

4.2.3 RAPD最优化反应的条件

5结论

5.1聚类结果分析

5.2 PCR反应的优化条件

5.3黑龙江省油豆角的生物学特征

5.4发现随机引物SBSF-5的鉴定作用

参考文献

图版

攻读学位期间发表的学位论文

致谢