绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究

摘要

该研究应用EFS40玻璃化液对6.5~7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验.所用胚胎都是经FSH超排处理绵羊获得的.胚胎经形态鉴定后,用胚胎存放液(含20﹪FCS的PBS液)清洗.冷冻前,胚胎在室温(18~25℃)下置于含10﹪乙二醇的PBS液中平衡10分钟,移入玻璃化液EFS40中装管并平衡30秒钟,液氮气中熏蒸2分钟后投入液氮中保存,解冻时在室温(18~25℃)空气浴10秒钟后,32℃水浴20秒钟解冻.试验1:胚胎解冻后以0.5M蔗糖液一步(6分钟)除去保护剂或用胚胎存放液一步直接除去保护剂,然后胚胎移入胚胎存放液中洗3次,将形态正常的胚胎手术移植至同期发情的受体绵羊子宫内;试验2:玻璃化冷冻胚胎解冻后在0.25ml聚乙烯塑料细管内脱除防冻剂直接装管移植,以常规冷冻解冻为对照组.该研究结果表明:绵羊胚胎应用EFS40进行玻璃化冷冻,解冻后用胚胎存放液细管内脱除防冻剂后直接移植获得较高的妊娠率和胚胎存活率.该方法与常规方法比较简便、省时、可普及,特别是能降低绵羊胚胎移植的成本,加速绵羊品种改良.

目录

文摘

英文文摘

1引言

1.1胚胎玻璃化冷冻原理

1.2抗冻保护剂

1.2.1低分子量可渗的保护剂

1.2.2低分子量不可渗物质

1.2.3大分子量不可渗物质

1.3冷冻方法

1.3.1玻璃化法

1.3.2开放式细管法

1.3.3冷环玻璃化法

1.4除去保护剂的方法

1.4.1逐步稀释法

1.4.2非渗透性溶液脱除法

1.4.3细管内稀释

1.5影响胚胎玻璃化冷冻保存效果的因素

1.5.1保护液的影响

1.5.2环境温度的影响

1.5.3玻璃化液中平衡时间的影响

1.5.4动物种类与胚胎发育阶段的影响

1.6研究的目的、意义

2材料和方法

2.1材料

2.1.1试验动物

2.1.2仪器和设备

2.1.3试验药品

2.1.4溶液的配制

2.2方法

2.2.1供、受体的同期发情及供体的超数排卵与胚胎回收

2.2.2胚胎冷冻程序

2.2.3胚胎解冻程序

2.2.4胚胎移植

2.2.5冷冻效果评价

3试验结果

3.1绵羊胚胎玻璃化冷冻结果

3.2不同发育阶段胚胎的玻璃化冷冻结果

3.3不同脱除保护剂方法的玻璃化冷冻胚胎的结果

3.4在EFS40玻璃化液中平衡不同时间的冷冻结果

3.5玻璃化法冷冻胚胎直接移植的结果

4讨论

4.1玻璃化冷冻的优点及对胚胎冷冻的影响

4.2脱除冷冻保护剂方法对绵羊胚胎玻璃化冷冻效果的影响

4.2.1一步脱除保护剂的影响

4.2.2细管内脱除冷冻保护剂直接移植

4.3胚胎发育阶段对玻璃化冷冻效果的影响

4.4冷冻前胚胎暴露在玻璃化液中的时间对冷冻效果的影响

4.5直接移植能避免一些问题

4.6其它因素的影响

5结论

6有待研究的内容

参考文献：

附图

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢