基因Ⅶ型新城疫病毒糖蛋白特异性抗原表位分析及多肽表达

摘要

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)腮腺炎病毒属(Rubulavirus)的成员,其主要结构蛋白融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)与其致病性密切相关.目前,在我国ND免疫预防的过程中,发现常规疫苗对于中国的流行毒株有时不能提供良好的免疫保护,因此寻找一种有效的疫苗是当务之急.研究发现,如果能够确定病毒蛋白的抗原表位,将几个病毒株的表位结合在一起,使其产生对不同毒株的抵抗,就可以达到思想的保护效果.因此,ND表位的研究正是优化疫苗的最佳途径.该研究首先分析了NDV国内流行毒株F基因的核芏酸序列特点,根据已知NDV F基因1-374位核苷酸绘制了系统发育进化树,发现近年来在中国出现的流行株多数都属于基因Ⅶ型.比较基因Ⅶ型各毒株之间核苷酸序列,发现各毒株之间同源率在91.7﹪-99.7﹪之间,在该实验室分离并保留的毒株中,GX-2-98与其他各毒株之间同源率多数是在95﹪以上,具有良好的代表性.因此,我们选取分离株GX-2-98进行有关ND表位的研究.

目录

文摘

英文文摘

1引言

1.1新城疫病毒NDV F及HN基因研究概况

1.1.1融合蛋白(Fusion glycoprotein,F)研究

1.1.2血凝素神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin-Neuraminidaseprotein,HN)研究

1.1.3ND疫苗的研究进展

1.2抗原表位研究概况

1.2.1表位的分类

1.2.2表位的预测方法

1.2.3表位的研究进展

1.2.4表位研究的应用前景

1.3结束语

2.1实验材料

2.2实验方法

2.2.1 F基因遗传变异分析

2.2.2 F及HN部分基因的RT-PCR扩增

2.2.4阳性重组子的筛选与鉴定

2.2.5核苷酸序列测定

2.2.8 F及HN多肽基因的表达

3实验结果

3.1 NDV F基因系统发育进化树

3.2 F基因同源性比较

3.3 F及HN基因RT-PCR扩增

3.4 F及HN基因PCR产物的克隆与鉴定

3.4.1 pMD18-T-Fa质粒的克隆与鉴定

3.4.2 pMD18-T-Fb质粒的克隆与鉴定

3.4.3 pMD18-T-HNa质粒的克隆与鉴定

3.5 NDV HN基因系统发育进化树

3.6 NDV HN基因同源性比较

3.7表位预测结果

3.8 F及HN基因表位多肽片段扩增

3.8.1表位多肽的扩增结果

3.8.2 F及HN基因多肽片段表达载体的克隆与鉴定

3.8.3多肽片段的比较

3.9 F及HN多肽基因的表达与鉴定

3.9.1外源蛋白表达

4讨论

5结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间所发表的学术论文

致谢

个人简历