甜菜无融合生殖M14品系易位系的创制、筛选及鉴定方法的建立

摘要

该文采用γ射线照射的方法加速产生易位系.首先利用γ射线处理栽培甜菜单体附加系M14种子,然后在温室中播种、调查不同放射剂量种子的成活率,并进行细胞学观察,最后对发生染色体变异的株系利用白花矩菜特异探针进行DNA分子杂交.共得到11株易位系,易位系发生率4.54﹪,明显高于自发易位0.26﹪的发生率,诱导作用明显.研究结果表明γ射线的剂量对甜菜的成活率及易位系产生的几率有很大影响.辐射强度越大,甜菜成活率越低,而染色体变异率和易位系发生率越高.综合两方面因素,强度为60Kr和80Kr的辐射效果较好.该文还对16个株系共264株易位系的后代进行斑点杂交,计算其总传递率为50.4﹪,这与理论值相符合.其中株系11的传递率为100﹪,株系14也达到83.3﹪,基本属于高频传递.最后该文对荧光原位杂交的染色体制片、变性、杂交、洗涤、信号检测等过程的实验条件进行了各种对比实验,摸索出一套较成功的实验方案,建立了易位系鉴定的基本程序.

目录

文摘

英文文摘

1前言

1.1植物无融合生殖的研究现状

1.1.1无融合生殖的概念及意义

1.1.2无融合生殖的胚胎学基础

1.1.3无融合生殖的遗传学机制

1.1.4无融合生殖基因的克隆

1.2甜菜单体附加系M14品系的获得及相关研究进展

1.3甜菜M14品系易位系的相关进展

1.3.1甜菜M14品系易位系的利用

1.3.2易位系的创制方法

1.3.3甜菜M14品系易位系的鉴定方法

1.4本研究的目的和意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1供试材料

2.1.2主要仪器设备

2.1.3主要药品

2.1.4主要试剂盒

2.1.5主要缓冲液及试剂配制方法

2.1.6主要耗材

2.2实验方法

2.2.1甜菜M14种子的γ射线辐射诱导

2.2.2细胞学观察

2.2.3斑点杂交

2.2.4荧光原位杂交

3实验结果

3.1探针制备

3.1.1质粒提取结果

3.1.2探针制备结果

3.1.3探针标记结果

3.1.4探针标记效率的检测结果

3.2利用γ射线照射法创制易位系

3.2.1 γ射线照射种子存活情况调查结果

3.2.2 γ射线照射种子出苗后的细胞学观察结果

3.2.3基因组DNA提取结果

3.2.4斑点杂交结果

3.3易位系传递率的分析

3.4荧光原位杂交实验方法的建立

3.4.1荧光原位杂交实验方案的摸索

3.4.2荧光原位杂交方法鉴定易位系

4讨论

4.1 γ射线辐射诱导产生易位的作用

4.2.1甜菜基因组总DNA提取方法的研究

4.2.2关于斑点杂交

4.3甜菜易位系传递率的分析

4.4关于荧光原位杂交方法

4.4.1探针标记

4.4.2染色体制片

4.4.3染色体制片的预处理

4.4.4杂交与洗涤

4.4.5信号检测

5结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

致谢