国内外PRRSV美洲型毒株结构基因序列分析及感染猪病理和细胞免疫变化的研究

摘要

1995年郭宝清等首次从国内疑似PRRS的猪群分离到PRRSV,从而证实中国也有PRRSV的流行,随后在中国大部分地区相继检出PRRSV.为查明中国不同地区PRRSV的来源及遗传学差异,为研制有效疫苗提供分子生物学根据,该研究在获得CH-la株完整的基因组序列以后,根据Genebank发表的序列,设计了不同的引物对,利用PCR技术,对对流行于中国山东(SD株)和大庆地区(DQ株)的PRRSV结构基因ORF2~ORF7各结构基因扩增条件进行优化,获得了不同的目的基因片段然后进行序列分析,并将其与CH-1a株、BJ-4株、LV株以及VR-2332株进行了比较分析.为深入研究PRRS的发病机理和PRRSV对断奶仔猪致病情况,该试验利用美洲型代表毒株VR-2332接种妊娠后期母猪和断奶仔猪,寻找病理变化特征和确定病毒组织分布,以便为有效预防、诊断和有针对性治疗提供理论依据.应用VR-2332强毒人工感染4头妊娠末期母猪和5头断奶仔猪,复制典型病例,对死胎和弱仔及感染断奶仔猪进行组织病理学检查,并用间接免疫荧光试验检测病毒组织分布.通过上述的实验研究,实现了对国内不同地区PRRSV代表株的结构基因解析,确定了国内流行的SD毒株和DQ毒株毒株均属于美洲型,与美洲型毒株具有高度的同源性.通过确定病毒侵害细胞和组织的种类和部位,为有针对性诊断指明采样方向.并通过监测对PRRSV感染猪细胞免疫和体液免疫,了解了PRRSV感染时猪体免疫功能的变化规律.这不仅为疫苗研制提供分子生物学基础,而且对建立快速的临床病理学诊断和合理的免疫方案以及高效灵敏的诊断方法创造良好条件.

目录

文摘

英文文摘

前言

文献综述

1、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)

1.1病原特性

1.2流行病学研究

1.3结语

2、抗PRRSV感染的免疫研究进展

2.1细胞免疫的分子基础

2.2 PRRSV感染与细胞免疫

2.3 PRRSV感染与体液免疫

2.4结语

实验一PRRSV DQ和SD分离株结构基因克隆及序列分析

1材料与方法

2结果分析

2.1病毒接种Marc-145细胞的病理变化

2.2 PCR扩增结果

2.3 ORF2～ORF7核苷酸序列分析

3讨论

3.1 ORF2

3.2 ORF3

3.3 ORF4

3.4 ORF5

3.5 ORF6

3.6 ORF7

4小结

实验二PRRSV人工感染猪病理学和病毒组织分布的研究

1材料与方法

1.1实验动物

1.2实验分组及接种病毒

1.3临床特征观察及间接免疫荧光试验

2结果

2.1临床症状

2.2死胎及弱仔的病理学检查

2.3人工接种断奶仔猪的病理学变化

2.4免疫组化结果

3讨论与小结

实验三猪感染PRRSV后细胞免疫和体液免疫变化规律的检测

1材料和方法

2结果

2.1 CD4+细胞变化

2.2 CD8+细胞的变化

3讨论

4 小结

图

参考文献

附录1实验中所用的试剂

附录2

致谢

作者简介