黄颡鱼精巢结构、精子发生及Sox基因扩增

摘要

本研究以性成熟的黄颡鱼为试验材料，采用光学显微技术、透射电镜技术以及分子生物学中基因克隆技术对黄颡鱼精巢的组织学、超微结构以及黄颡鱼Sox基因进行研究探讨。得到结论如下：　　1.通过对黄颡鱼精巢的组织学研究，进一步证实黄颡鱼的精巢为典型的小叶型精巢，但其精小叶和贮精囊结构比较复杂，故在繁殖季节不能用外力挤出精子。　　2.黄颡鱼精原细胞分为两种，即A型和B型。但A型精原细胞又存在两种不同的形态，分别是A1型和A2型，两者的区别在于A1型不具有拟染色体，并且其线粒体内无嵴或有极少的嵴出现。　　3.黄颡鱼除A1型精原细胞外的各期生殖细胞都存在拟染色体，并且随着细胞的不断发育拟染色体逐渐变小分散，最后在精子内完全消失。　　4.黄颡鱼初级精母细胞的前期出现联会复合体，应是同源染色体之间进行同源基因交换的标志。　　5.黄颡鱼精子形成过程分为三个时期，即早期、中期和晚期。　　6.在扫描电镜下，黄颡鱼精子头部椭圆形，其长径约为1.70μm，短径约为1.50μm尾部鞭毛长度大约为25～30μm，从植入窝正中伸出，植入窝口直径约为0.40μm，鞭毛直径约为0.18μm。　　7.本研究采用四种引物，以黄颡鱼DNA为模板进行扩增，结果显示：黄颡鱼在220bp、400bp、450bp、750bp和900bp左右都出现谱带，无性别差异。对220bp的谱带进行测序分析，证明该片段长度为221bp，且雌雄个体间仅有一个碱基不同，为同源基因。与人的SRY基因比较，同源性为41.67％。由于其同源性较低，故不能确定该基因是否参与性别分化。

目录

文摘

英文文摘

1引言

1.1鱼类精巢的结构和发育

1.1.1硬骨鱼类精巢结构

1.1.2软骨鱼类精巢结构

1.1.3精巢发育

1.2鱼类精子发生和精子形态结构

1.2.1鱼类的精子发生

1.2.2硬骨鱼精子的形态结构

1.2.3软骨鱼精子的形态结构

1.3鱼类卵巢结构和发育

1.3.1硬骨鱼类卵巢的结构

1.3.2硬骨鱼类卵巢的发育

1.3.3硬骨鱼类卵子发生及卵子的形态结构

1.3.4硬骨鱼类产卵类型

1.3.5软骨鱼类雌性生殖系统的结构与发育

1.4雌雄性腺嵌合现象

1.5动物性别决定的分子机理

1.5.1 SRY/Sry基因的发现过程及结构研究

1.5.2Sox(SRY-type HMG-box)基因家族

1.5.3与性别决定及性腺发育有关的Sox基因

1.5.4其它性别决定基因

1.5.5性别决定的分子模型

1.6鱼类SOX基因研究进展

1.6.1鱼类Sox基因研究的现状

1.6.2鱼类Sox基因研究的意义

1.7黄颡鱼生物学特性及发育生物学研究概况

1.7.1黄颡鱼生物学特性

1.7.2黄颡鱼发育生物学研究概况

1.8研究的目的和意义

1.9本研究的主要内容

2材料与方法

2.1试验材料

2.2试验器材与试剂

2.2.1主要试剂和药品的配制

2.2.2主要仪器设备

2.3试验方法

2.3.1光镜标本的制备

2.3.2电镜标本的制备

2.3.3黄颡鱼DNA的提取

2.3.4引物的设计合成

2.3.5 PCR扩增

2.3.6感受态细胞的制备

2.3.7 PCR产物的连接

2.3.8连接产物的转化

2.3.9转化菌落的PCR鉴定与培养

2.3.10 PCR克隆产物的序列测定

3结果与分析

3.1精巢的组织学结构

3.1.1精小叶

3.1.2小叶间质

3.1.3小叶腔

3.1.4贮精囊

3.1.5输精管

3.2精巢超微结构

3.2.1各级生精细胞的超微结构

3.2.2精巢中非生殖细胞(non-germinal cell)的超微结构

3.3精子的形成及超微形态结构

3.3.1精子超微形态观察

3.3.2精子形成过程

3.3.3精子的超微结构

3.4Sox基因的扩增及PCR产物序列分析

3.4.1引物N1、N2扩增结果

3.4.2引物C1、C2扩增结果

3.4.3引物W1、W2扩增结果

3.4.4引物Y1、Y2扩增结果

3.4.5 PCR产物的序列分析

4讨论

4.1精巢的组织学

4.1.1精巢的组织结构

4.1.2精巢结构与排精方式的关系

4.2精巢的超微结构

4.2.1精原细胞的超微结构与分类

4.2.2精母细胞的超微结构

4.2.4拟染色体

4.2.5非生殖细胞

4.3精子的发生与形成及其形态结构

4.3.1精子的发生与形成

4.3.2精子的形态结构

4.4SOX基因

4.5黄颡鱼的性别决定分子机制的探讨

4.6需要进一步研究的问题

5结论

致谢

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文