A型及H5亚型禽流感病毒检测抗原的制备

摘要

禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus，AIV)是禽流行性感冒(简称禽流感，AvianInfluenza,AI)的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡，对家禽养殖业影响严重，并可引起人的感染和死亡。AIV基因组为8节段负链RNA，共编码10种与病毒结构和功能关的蛋白质，其中核蛋白(Nucleoprotein，NP)和基质蛋白(Matrixprotein，M)具有型特异性，是AIV分型的依据；血凝素(Haemagglutinin，HA)是AIV囊膜纤突的主要成分之一。 本试验利用pBlueBacHis2A杆状病毒载体在昆虫细胞中表达H5亚型AIV的HA和HA1，通过WesternBlotting证明了表达产物具有抗原性，且不与鸡、鸭的H7和H9亚型的抗血清发生交叉反应。Dot-ELISA结果显示，表达的HA1可以在非变性条件下与相应抗体作用，表现良好的抗原性。通过对15个亚型(HI～H15)AIV代表毒株的HA1、HA2氨基酸序列一致性的分析表明：15个亚型中HA1氨基酸序列一致性为9.4％～40.2％，HA2氨基酸序列一致性为29.8％～92.7％，HA1是各H亚型间差异的主要区域：同时已有研究证明H5亚型AIV的HA分子结构中所有抗原表位都位于HA1区域，因此初步认为利用HA1作为检测抗原比HA全长更具有优势。 本试验利用pET-30a(+)原核表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中表达AIV的M1，利用6个组氨酸同Ni2+亲和层析技术得到纯化MI。通过WesternBlotting证明表达产物具有抗原性，可作为检测抗原来检测鸡和鸭的H5、H7、H9亚型AIV抗血清。同时利用pET-30a(+)原核表达载体分别在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS和Rosetta(DE3)pLysS中表达AIV的NP，在补充稀有密码子的Rosetta(DE3)pLysS中NP的表达量明显高于在BL21(DE3)pLysS。Ni2+亲和层析得到纯化的NP，同样可以作为检测抗原来检测鸡和鸭的H5、H7、H9亚型AIV抗血清。 利用本试验表达的HA1、HA作为检测抗原，可应用于H5亚型AIV抗血清的检测，NP、M1可以作为A型AIV抗血清的检测。同时“M1-鸭AIV抗血清-HRP标记兔抗鸭抗体”检测鸭抗血清的方式在国内外尚未见报道，这将对鸭AIV血清学的检测和监测具有重要的意义。

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1前言

2材料与方法

3结果与分析

4讨论

5结论

致谢

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