RNA干涉对猪体细胞肌生成抑制素基因表达的影响

摘要

肌生成抑制素基因(myostatin，MSTN)是转化生长因子-β(TGF-β)超家族的一员，研究表明，Myostatin基因在抑制骨骼肌的生长、调节脂肪的积累、肌肉衰竭和再生、骨折愈合等生理活动中都发挥着重要作用。 RNA干涉(RNAinterference，RNAi)是指由双链RNA介导的mRNA的特异性降解反应，它首先在秀丽线虫中被发现。相关于RNA干涉的一系列基因沉默现象已在真核王国中的许多物种中被发现。这一现象的主要效应因子是被称为小干涉RNA(siRNA)的、21-23bp长的双链RNA分子。长的双链RNA分子首先被一种RNA酶Dicer切割成siRNA，然后由这些小分子作为mRNA识别和切割的模板。RNA干涉将会成为哺乳动物基因功能研究的有力工具。 本研究建立了仔猪骨骼肌卫星细胞和猪胎儿成纤维细胞体外培养体系，构建了抑制猪MSTN基因表达的干涉质粒。本实验共选择了3个猪肌生成抑制素基因的mRNA干涉位点，设计合成三对特异的寡核苷酸链和一对非特异的寡核苷酸链，通过退火形成双链后依次将其连入带有U6启动子的干涉载体psiSTRIKE上，得到含四个目的DNA片段的重组质粒。通过脂质体转染的方法将重组干涉质粒，转染仔猪骨骼肌卫星细胞和猪胎儿成纤维细胞，并将其分为3组：实验组、阴性质粒对照组和空白对照组。经过G418筛选后用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测仔猪骨骼肌卫星细胞和猪胎儿成纤维细胞中肌生成抑制素基因mRNA表达的改变。经RT-PCR检测，实验组中肌生成抑制素基因的mRNA表达明显低于两个对照组(P＜0.05)，两对照组间比较差别无统计学意义。两种细胞间的RNA干涉效果差异显著(P＜0.05)，Myostatin基因在仔猪骨骼肌卫星细胞中的RNA干涉效果显著低于猪胎儿成纤维细胞中的RNA干涉效果。

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1前言

2材料与方法

3结果与分析

4讨论

5结论

致谢

参考文献

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