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声明
1引言
1.1鸡传染性支气管炎概述
1.2鸡传染性支气管炎病毒的分子生物学研究进展
1.2.1鸡传染性支气管炎病毒生物学分类地位
1.2.2鸡传染性支气管炎病毒基因组结构
1.2.3鸡传染性支气管炎病毒的结构蛋白
1.2.4鸡传染性支气管炎病毒的分子变异
1.3鸡传染性支气管炎疫苗的研究进展
1.3.1IB灭活苗
1.3.2IB弱毒疫苗
1.3.3IB基因工程疫苗
1.3.41B活疫苗存在的问题
1.4研究目的和意义
1.5研究内容和方法
2材料与方法
2.1病毒
2.2鸡外周血红细胞、SPF鸡胚、SPF雏鸡
2.3载体与受体菌
2.4主要试剂
2.5主要仪器设备
2.6引物
2.7病毒增殖
2.8红细胞凝集试验
2.9电镜检测
2.10RT-PCR检测
2.10.1病毒RNA的提取
2.10.2反转录
2.10.3聚合酶链式反应
2.11PCR产物的纯化回收
2.12PCR产物的连接与转化
2.13重组质粒提取、鉴定及序列测定
2.13.1碱裂解法提取质粒
2.13.2重组质粒的鉴定
2.13.3序列测定
2.14基因序列确定及分析、比较
2.15IB疫苗及致弱株对异种IBV分离株的保护评价
2.15.1疫苗毒半数鸡胚感染量(EID50)的测定
2.15.2实验设计
2.15.3免疫鸡血清的抗体检测
2.15.4免疫鸡攻毒后器官的采集及病毒的分离
3结果
3.1商品疫苗毒及致弱毒致鸡胚病变特征
3.2红细胞凝集试验
3.3电镜检测结果
3.4RT-PCR检测结果
3.4.1CK/CH/1D1/97ⅠN基因的鉴定
3.4.2CK/CH/1D1/97Ⅰs1基因的扩增、回收及质粒鉴定
3.5CK/CH/1D1/97ⅠS1基因推导的氨基酸序列分析
3.6病毒毒价(EID50)测定结果
3.7免疫鸡群的抗体检测
3.8攻毒试验
3.9气管和肾脏的病毒分离
4讨论
4.1病毒增殖及鉴定
4.2CK/CH/1D197ⅠS1基因的同源性分析
4.3对异种IBV分离株的保护评价
5结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
附录