抗部分植物病原真菌放线菌的分离及新种鉴定

摘要

本研究旨在土壤中分离出对多种植物病原真菌具有强烈拮抗作用的放线菌，并对菌株进行鉴定，并对其抑菌活性物质进行分离，寻找新型农用抗生素的产生菌来源。
　　 本试验以选择性腐殖酸培养基为分离培养基，从广西省龙眼树和菩提树的根际土壤分离得到37株放线菌，采用管碟法测定了放线菌发酵液对细菌的抑菌活性，其中有11株放线菌的抑菌圈直径≥15mm，检测这11株放线菌对番茄早疫病菌，水稻纹枯病菌，黄瓜枯萎病菌，黄瓜褐斑病菌，甜椒菌核病菌五种植物治病真菌的抑菌活性，结果它们至少对1种真菌有抑菌作用，对3种以上真菌有抑制作用的菌株有6株，分别为L9、P1、P6、P9、P12、P13，其中L9菌株对5种真菌都有抑菌作用，并且抑菌直径都在15mm以上。
　　 由于P23菌株的形态特异性，我们对其进行了分类学鉴定。该菌株为革兰氏阳性菌，严格好氧菌，在ISP3培养基上培养三周，菌丝分支不断裂，在气生菌丝上产生直链孢子，并产生黑色素。（G+C）mol％为76.6mol％。通过与来自GenBank其他16SrRNA序列的初步比对，P23菌株与异壁放线菌属的已发表菌种的序列相似性最高，分别为A.cyanogriseusIFO14455T（96.4％），A.spitiensisDSM44848T（96.6％）和A.hymeniacidonHPA177T（98.1％），与相关属的其他种的序列相似性不到95％，并在系统发育树上形成独立的分支，进一步DNA杂交显示，P23菌株与A.hymeniacidonis的相似性为46.8％，低于国际系统细菌学委员会规定的70％。该菌株具有异壁放线菌属典型的化学生态学特征：meso-A2pm为细胞壁的主要氨基酸；半乳糖，葡萄糖，甘露糖和核糖为细胞的主要水解糖：iso-和anteiso分支脂肪酸为细胞的主要脂肪酸；MK-9（H4）为细胞的主要醌类。但该菌株含有更大量的MK-10（H4）和C18:0饱和脂肪酸，并且环丙烷酸C17:0在异壁放线菌属的其他种中未见报道。
　　 通过表型鉴定，生理生化水平鉴定，化学分类学鉴定以及分子生物学鉴定，P23菌株属于异壁放线菌属，并为一新种，命名为Actinoalloteichusnanshanensissp.nov.保藏在中国科学院微生物研究所和日本技术评价研究所生物资源中心（=CMCC4.5714T=NBRC106685T）。

目录

文摘

英文文摘

CONTENTS

1 引言

1.1 生物农药

1.1.1 生物农药的特点

1.2 农用抗生素

1.2.1 农用抗生素的定义

1.2.2 农用抗生素的主要作用

1.3 农用抗生素产生菌的筛选

1.3.1 放线菌的分类地位、特点

1.3.2 放线菌形态结构、生态分布

1.3.3 土壤放线菌的分离、筛选

1.3.4 放线菌的分类研究概况

1.4 课题来源、研究内容

1.4.1 课题来源

1.4.2 研究内容

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 共试土样

2.1.2 培养基

2.1.3 生物活性测定细菌

2.1.4 生物活性测定真菌

2.1.5 引物设计

2.1.6 主要仪器

2.1.7 主要试剂

2.2 方法

2.2.1 放线菌的分离、纯化和发酵培养

2.2.2 生物活性测定

2.2.3 菌株P23的鉴定

3 结果与分析

3.1 土壤中放线菌的分离结果

3.2 抑菌活性的测定

3.2.1 抑细菌活性的测定

3.2.2 抑真菌活性测定

3.3 P23菌株的鉴定

3.3.1 P23菌株16S rRNA鉴定

3.3.2 P23菌株的形态特征

3.3.3 P23菌株的生长和培养特征

3.3.4 P23菌株的生理生化特征

3.3.5 P23菌株的化学生态学鉴定

3.3.6 P23菌株的分子鉴定

4 讨论

4.1 放线菌选择性分离

4.2 放线菌产物的活性研究

4.3 菌种保存

4.4 P23菌株的研发前景

5 结论

5.1 放线菌的分离

5.2 抑细菌活性检测

5.3 抑真菌活性检测

5.4 P23菌株的分类地位

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文