番茄Mi-1基因SNP标记开发及种质资源的筛选

摘要

番茄是对根结线虫最为敏感的作物之一，特别是保护地蔬菜周年栽培，使保护地内根结线虫病害逐年严重，到目前仍然缺乏直接有效的防治手段，针对根结线虫开发分子标记，辅助育种培育出含有抗根结线虫基因的番茄材料，从根本上解决问题根结线虫病害问题是抗根结线虫育种的发展趋势。
　　 本研究旨在开发番茄抗根结线虫Mi基因的SNP标记；建立开发番茄SNP标记的可行方法和技术。研究主要成果如下：
　　 1.应用本课题组提供的番茄抗根结线虫材料抗病亲本08576，感病亲本T431，构建F2分离群体438个单株，通过对亲本及F2分离群体的抗病性鉴定，表明其遗传模式符合孟德尔的显性单基因遗传规律。
　　 2.引物的多态性经F2分离群体验证，多次重复扩增能稳定扩增出多态性片段。经F2及种质资源验证，筛选出稳定的抗根结线虫SNP标记S1090，S3570。
　　 3.应用筛选所得引物，对课题组47份番茄材料进行实验室鉴定，筛选出抗病材料3份为08576，07743，07663，与人工接种调查结果基本一致，吻合率为75％，进一步证明了该标记的应用价值，为分子标记辅助选择育种奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

CONTENTS

1 引言

1.1 研究的目的意义及技术路线

1.1.1 目的意义

1.1.2 试验设计

1.2 文献综述

1.2.1 番茄根结线虫病研究进展

1.2.2 番茄抗线虫基因工程进展

1.2.3 分子标记研究现状

1.2.4 SNP标记的研究现状

2 材料方法

2.1 材料

2.1.1 供试番茄材料

2.1.2 病原

2.2 试验方法

2.2.1 病原物接种

2.2.2 番茄根结线虫病抗性鉴定

2.2.3 叶片总DNA的提取

2.2.4 目的基因序列获取

2.2.5 双亲PCR产物测序和生物学信息比对

2.2.6 等位基因特异PCR

2.2.7 SNP分子标记开发以及种质资源筛选

3 结果与分析

3.1 病源线虫的繁殖与接种

3.2 遗传群体的构建和抗性鉴定

3.2.1 遗传群体的构建

3.2.2 抗病性鉴定结果

3.3 番茄DNA的提取

3.4 目的基因序列获取

3.4.1 目的基因序列的获得和扩增

3.4.2 双亲PCR扩增产物的凝胶回收与纯化

3.4.3 PCR纯化产物的连接、转化与鉴定

3.5 双亲PCR产物测序和生物学信息比对

3.5.1 双亲PCR产物测序

3.5.2 生物学信息比对结果

3.6 等位基因特异PCR

3.6.1 等位基因引物设计以及特异性的提高

3.6.2 F2分离群体的SNP分型

3.6.3 AS-PCR反应体系的优化

3.7 SNP分子标记的获得

3.8 种质资源鉴定

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文