益生素雏鸡ND免疫后局部黏膜组织细胞免疫及IL-2 mRNA表达变化

摘要

本项研究采用酸性α-醋酸萘酯酶染色法、免疫酶组织化学法、透射电镜法和荧光定量PcR检测技术。对服用益生素及其与ND疫苗联合使用后，雏鸡呼吸道和消化道局部黏膜免疫组织一哈德尔氏腺、盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结的T细胞及其亚群CD4+T、CD8+T细胞数量和IL-2mRNA表达的动态变化进行了较全面系统的研究，揭示益生素及其与ND疫苗联合使用后，雏鸡局部黏膜细胞免疫变化规律及其机制。结果发现：
　　 1.服用益生素雏鸡，其哈德尔氏腺、盲肠扁桃体、十二指肠及回肠派伊尔结T细胞数量在4-14天较对照雏鸡明显增多（P<0.05或P<0.01）；ND疫苗免疫后7-42天，益生素组、ND疫苗组、益生素ND免疫雏鸡上述免疫组织T细胞数量明显高于空白对照雏鸡（P<0.05或P<0.01）；其中，ND疫苗组、益生素ND免疫雏鸡上述组织被检指标明显高于益生素雏鸡（P<0.05或P<0.01）：益生素ND免疫雏鸡局部免疫组织T细胞数量又不同程度高于ND疫苗单独免疫雏鸡，表明益生素可促进局部免疫组织发育，增强雏鸡消化道和呼吸道局部黏膜的细胞免疫和对ND疫苗的免疫应答效应。
　　 2.益生素组、ND疫苗组、益生素ND免疫雏鸡哈德尔氏腺、盲肠扁桃体、十二指肠及回肠派伊尔结CD4+T细胞数量均不同程度高于空白对照雏鸡（P<0.05或P<0.01）；益生素ND免疫雏鸡上述被检指标均不同程度高于ND疫苗单独免疫雏鸡，但统计学差异不显著（P>0.05）。表明疫苗接种提高了机体局部黏膜的细胞免疫水平。ND疫苗免疫雏鸡上述免疫组织的CD8+T细胞数量明显低于未接种疫苗的益生素雏鸡和空白对照雏鸡（P<0.05或P<0.01），这种变化是有利于细胞的激活，细胞因子的释放和抗体的产生。
　　 3.益生素组、ND疫苗组、益生素ND免疫雏鸡哈德尔氏腺、盲肠扁桃体、十二指肠及回肠派伊尔结IL-2mRNA表达均不同程度高于对照雏鸡（P<0.05或P<0.01）；益生素ND免疫雏鸡上述免疫组织被检指标不同程度高于ND疫苗单独免疫雏鸡，表明益生素添加和ND疫苗接种刺激T细胞增殖、分化，从而促进IL-2mRNA表达。
　　 4.ND强毒攻击后，对照雏鸡全部发病死亡，发病率和死亡率达100％：益生素雏鸡和ND疫苗单独免疫雏鸡发病率分别为60％、20％，但均耐过；益生素ND免疫雏鸡未见异常变化；表明益生素可提高机体的抵抗力，增强ND疫苗的免疫效果，使机体能更有效抵抗强毒的攻击。
　　 5.组织超微结构检查发现，应用益生素雏鸡，其盲肠扁桃体、十二指肠和回肠微绒毛长度增加，吸收细胞的线粒体、高尔基体、核糖体、内质网增多；杯状细胞增加：哈德尔氏腺腺泡内有大量分泌颗粒。

目录

文摘

英文文摘

CONTENTS

1 引言

1.1 益生素及其研究进展

1.1.1 益生素概述

1.1.2 常用作益生素的微生物

1.1.3 益生素作用机制

1.1.4 益生素的应用

1.2 新城疫及其研究进展

1.2.1 新城疫病原

1.2.2 NDV致病机制

1.2.3 新城疫流行病学及其在我国的流行情况

1.3 禽黏膜免疫研究进展

1.3.1 禽黏膜免疫系统的组成

1.3.2 禽黏膜相关淋巴组织

1.3.3 禽黏膜免疫系统的功能

1.4 自介素-2及其研究进展

1.4.1 IL-2 概述

1.4.2 IL-2 的结构

1.4.3 IL-2 产生和功能

1.4.4 IL-2R

1.4.4 IL-2 应用

1.5 本研究的目的和意义

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 益生素

2.1.3 ND疫苗和ND强毒

2.1.4 主要生物制剂和化学试剂

2.1.5 主要仪器设备

2.2 实验方法

2.2.1 实验动物分组及其处理

2.2.2 实验材料采取及处理

2.2.3 检测指标及方法

2.3 数据处理

3 结果与分析

3.1 益生素雏鸡局部免疫组织T细胞数量变化

3.1.1 益生素雏鸡局部黏膜免疫组织T细胞数量变化

3.1.2 益生素ND免疫雏鸡局部黏膜免疫组织T细胞数量变化

3.1.3 ND强毒攻击雏鸡后局部黏膜免疫组织T细胞数量变化

3.2 益生素雏鸡局部免疫组织CD4+T细胞数量变化

3.2.1 益生素雏鸡局部黏膜免疫组织CD4+T细胞数量变化

3.2.2 益生素ND免疫雏鸡局部黏膜免疫组织CD4+T细胞数量变化

3.2.3 ND强毒攻击雏鸡后局部免疫组织CD4+T细胞数量变化

3.3 益生素雏鸡局部免疫组织CD8+T细胞数量变化

3.3.1 益生素雏鸡局部黏膜免疫组织CD8+T细胞数量变化

3.3.2 益生素ND免疫雏鸡局部黏膜免疫组织CD8+T细胞数量变化

3.3.3 ND强毒攻击雏鸡后局部黏膜免疫组织CD8+T细胞数量变化

3.4 雏鸡局部免疫组织IL-2 mRNA表达Real Time PCR检测方法的建立

3.4.1 总RNA提取

3.4.2 Real Time PCR检测IL-2 mRNA表达的建立

3.5 益生素雏鸡局部免疫组织IL-2 mRNA表达

3.5.1 益生素雏鸡局部黏膜免疫组织IL-2 mRNA表达

3.5.2 益生素ND免疫雏鸡局部黏膜免疫组织IL-2 mRNA表达

3.5.3 ND强毒攻击雏鸡后局部免疫组织IL-2 mRNA的表达

3.6 ND强毒攻击雏鸡后发病及保护情况

3.7 益生素雏鸡局部免疫组织超微结构变化

4 讨论

4.1 益生素对雏鸡局部黏膜细胞免疫变化的影响

4.2 应用益生素雏鸡局部黏膜对ND疫苗的细胞免疫应答

4.3 益生素对雏鸡局部黏膜免疫组织IL-2mRNA表达的影响

4.4 益生素对雏鸡局部黏膜免疫组织超微结构变化的影响

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文