连翘酯苷对鸡肝脏抗氧化及抗炎活性研究

摘要

连翘是我国传统中药，临床应用十分广泛，疗效确切，毒副作用低，并且生物活性多样。从连翘中提取的苯乙醇苷类成分连翘酯苷，是连翘发挥抗菌、抗病毒、抗氧化等药理活性的主要有效成分之一。目前，国内外对连翘酯苷的报道主要集中在抗细菌和抗病毒及免疫调节作用方面，在其体内抗炎及抗氧化作用鲜见报道。肝脏不仅是全身单核巨噬细胞系统最为集中的场所，而且清除内毒素的主要组织器官，所以肝脏是LPS引起全身炎症反应中最易受损的器官之一。因此，寻找有效的药物减轻LPS导致的肝损伤对肝脏疾病和LPS性多器官功能衰竭的防治具有重要的临床价值。故本实验采用了LPS诱导的鸡炎症模型，探讨了连翘酯苷对鸡肝脏的抗炎及抗氧化作用，为连翘酯苷抗炎机制的研究和临床应用提供理论依据。
　　 本试验首先研究了连翘酯苷对LPS诱导的鸡肝脏组织抗氧化能力的影响，将AA鸡随机分组，连翘酯苷高、低剂量组，空白对照组和LPS对照组。分别提取各组的肝脏组织，检测其中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)及总抗氧化能力(T-AOC)的水平。试验结果显示，与LPS对照组比较，连翘酯苷组(30、60mg/kg) SOD、T-AOC活力及GSH含量明显升高(P＜0.05)，而MDA的含量显著降低(P＜0.05)。说明连翘酯苷能通过减轻鸡氧化应激，抑制脂质过氧化反应，有效提高肝脏抗损伤的能力。
　　 其次，本试验分别采用硝酸盐还原酶法检测鸡肝脏中的NO含量，荧光定量方法检测iNOS mRNA的表达水平。试验结果显示，与LPS对照组相比，连翘酯苷组(30、60mg/kg)鸡肝脏组织中NO的含量和iNOS mRNA的表达水平明显降低(P＜0.05)。iNOS是合成NO的关键酶，连翘酯苷能减少NO的产生，可能是通过抑制iNOS的表达来实现的。减轻NO介导的肝脏炎症反应，可能是连翘酯苷发挥抗炎作用的机理之一。
　　 最后，本试验采用ELISA和荧光定量PCR的方法分别从蛋白水平和分子水平检测肝脏组织中IL-1β、IL-6、IL-17的含量。试验结果显示，与空白组比较，LPS对照组鸡肝脏组织中的IL-1β、IL-6和IL-17含量显著升高(P＜0.05);与LPS对照组比较，连翘酯苷组(30、60mg/kg)鸡肝脏组织中的的IL-1β、IL-6和IL-17含量明显下降(P＜0.05)。实验证明连翘酯苷通过抑制由LPS诱导鸡肝脏炎症因子(IL-17、IL-1β、IL-6、iNOS)的产生，有效减轻炎症反应。
　　 综上所述，本研究证实了连翘酯苷对LPS诱导的鸡炎症有明显的抑制作用，并阐述了其与部分炎症介质及抗氧化的关系，为连翘酯苷在炎症导致的肝损伤临床治疗及深入研究奠定基础。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 炎症概述

1．2 中药抗炎研究进展

1．2．1 中药抗炎有效成分

1．2．2 中药抗炎的作用机制

1．3 连翘概况

1．3．1 连翘主要化学成分

1．3．2 连翘主要药理作用

1．3．3 连翘酯苷概况

1．4 研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 试验动物

2．1．2 药品及试剂

2．1．3 仪器设备

2．1．4 常用溶液配制

2．2 方法

2．2．1 实验动物分组及给药

2．2．2 实验样本预处理

2．2．3 检测指标及方法

2．2．4 统计方法

3 结果与分析

3．1 连翘酯苷对鸡肝脏组织中SOD活性的影响

3．2 连翘酯苷对鸡肝脏组织中T-AOC活性的影响

3．3 连翘酯苷对鸡肝脏组织中MDA含量的影响

3．4 连翘酯苷对鸡肝脏组织中GSH含量的影响

3．5 连翘酯苷对鸡肝脏组织中NO和iNOS表达的影响

3．6 连翘酯苷对鸡肝脏组织中IL-1β含量的影响

3．7 连翘酯苷对鸡肝脏组织中IL-6含量的影响

3．8 连翘酯苷对鸡肝脏组织中IL-17含量的影响

4 讨论

4．1 连翘酯苷对鸡肝脏组织抗氧化能力的影响

4．1．1 连翘酯苷对鸡肝脏组织中SOD活性的影响

4．1．2 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中T-AOC活性的影响

4．1．3 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中MDA含量的影响

4．1．4 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中GSH含量的影响

4．1．5 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中NO和iNOS表达的影晌

4．2 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中细胞因子的影响

4．2．1 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中IL-1β的影响

4．2．2 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中IL-6的影响

4．2．3 连翘酯苷对肉鸡肝脏组织中IL-17的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文