土鳖虫冻干粉对高脂饮食肉兔血脂及相关基因表达的影响

摘要

土鳖虫是我国传统的中药材，古代著作中便有所记载，具有行瘀破血、消肿化积、通经活络之功用，因其毒性小，蛋白质含量丰富，也被用来当成菜肴食用。药理研究表明土鳖虫具有调节血脂、抗肿瘤、抗氧化等功效，可以用来治疗和预防疾病。 本试验旨在研究土鳖虫冻干粉对高脂饮食肉兔血脂生理指标的影响和相关基因的表达，探讨土鳖虫冻干粉调节血脂水平的可能分子机制。试验选择健康的150只伊拉肉兔随机分成5组，分别为空白组（普通饲料）、高脂组（高脂饲料）、高剂量组(高脂饲料+土鳖虫冻干粉0.4 g/kg)、中剂量组(高脂饲料+土鳖虫冻干粉0.2 g/kg)、低剂量组(高脂饲料+土鳖虫冻干粉0.1 g/kg)。每10天每组随机抽取5只肉兔称重并心脏静脉采血，分离血清，用于测量血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。试验第20天和第40天随机抽取三只肉兔宰杀取肝，用于研究血脂有关基因载脂蛋白E(ApoE)基因和低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因的时空表达，探讨土鳖虫冻干粉发挥药效的可能分子机制。主要试验结果表明: 1.试验各组肉兔体重无明显差异。高脂组肝脏器官指数明显增加，且显著高于空白组(p＜0.05);高、低剂量组肝脏器官指数增加，且与空白组和高脂组差异均不显著(p＞0.05);中剂量组肝脏器官指数有降低的趋势，且与空白组差异不显著(p＞0.05)，而显著低于高脂组(p＜0.05)。 2.高脂组血脂水平显著高于空白组(p＜0.05);高剂量组和低剂量组TC、TG显著高于空白组(p＜0.05)，与高脂组差异不显著(p＞0.05);高、中、低剂量组LDL-C均与空白组差异不显著(p＞0.05)，均显著低于高脂组(p＜0.05);高、中、低剂量组HDL-C均显著高于空白组和高脂组(p＜0.05);中剂量组TC、TG、LDL-C水平显著低于高脂组(p＜0.05)，与空白组差异不显著(p＞0.05)。 3.高脂组肝脏ApoE基因表达量降低，且显著低于空白组(p＜0.05);高剂量组、低剂量组与空白组差异均不显著(p＞0.05)，高剂量组与高脂组差异不显著(p＞0.05)，低剂量组显著高于高脂组(p＜0.05);中剂量组表达量显著高于空白组、高脂组、高剂量组和低剂量组(p＜0.05)。 4.高脂组肝脏LDL-R基因表达量降低，且显著低于空白组(p＜0.05);高剂量组和低剂量组与空白组差异均不显著(p＞0.05);高剂量组与空白组和高脂组差异均不显著（p＞0.05）;中剂量组和低剂量组表达量升高，且均显著高于空白组、高脂组和高剂量组（p＜0.05）。其中，以中剂量组表达量最高。 结论:土鳖虫冻干粉可以抑制因高脂饮食而引起的肉兔血脂TC、TG、LDL-C水平的升高。土鳖虫冻干粉可以显著升高HDL-C含量。土鳖虫冻干粉调节血脂水平的机制可能与提高ApoE基因和LDL-C基因的表达量有关。土鳖虫冻干粉预防血脂升高的最佳剂量中剂量组(2 g/kg)，用药时间为40天左右。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 土鳖虫的研究概述

1．1．1 名典记载

1．1．2 生物学研究概述

1．1．3 土鳖虫的药理作用

1．1．4 土鳖虫化学成分及炮制方法

1．2 冻干粉

1．3 高血脂

1．4 与血脂相关基因研究

1．4．1 载脂蛋白E基因(ApoE)研究进展

1．4．2 低密度脂蛋白受体基因(LDL-R)研究进展

1．5 试验研究的目的、内容和意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 试验动物与饲养管理

2．1．2 试验设计

2．1．3 主要仪器设备及试剂

2．2 试验方法

2．2．1 组织样品的采集及处理

2．2．2 测定指标及方法

2．2．3 肝脏中总RNA的提取及反转录

2．2．4 荧光定量PCR(Real time PCR)反应条件

2．2．5 试验数据统计分析

3 结果与分析

3．1 体重与肝重

3．1．1 体重变化

3．1．2 肝脏器官指数的变化

3．2 血清中脂肪水平的变化

3．2．1 总胆固醇的变化

3．2．2 甘油三酯

3．2．3 高密度脂蛋白胆固醇

3．2．4 低密度脂蛋白胆固醇

3．3 mRNA表达检测

3．3．1 肉兔肝脏总RNA的提取与检测

3．3．2 荧光定量候选基因的扩增及检测

3．3．3 GAPDH基因标准曲线制作

3．3．4 ApoE基因在家兔肝脏中的表达

3．3．5 LDL-R基因在家兔肝脏中的表达

4 讨论

4．1 土鳖虫冻干粉对体重及肝脏器官指数的影响

4．2 土鳖虫冻干粉对肉兔血脂水平的影响

4．2．1 土鳖虫冻干粉对肉兔血脂TC的影响

4．2．2 土鳖虫冻干粉对肉兔血脂TG的影响

4．2．3 土鳖虫冻干粉对肉兔血脂HDL-C的影响

4．2．4 土鳖虫冻干粉对肉兔血脂LDL-C的影响

4．3 土鳖虫冻干粉对肉兔血脂相关基因的影响

4．3．1 土鳖虫冻干粉对肉兔肝脏ApoE基因的影响

4．3．2 土鳖虫冻干粉对肉兔肝脏LDL-R基因的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文