声明
摘要
1 前言
1．1 犬新孢子虫病概述
1．2 犬新孢子虫对宿主细胞的入侵
1．3 犬新孢子虫入侵相关蛋白生物学研究进展
1．3．1 微线体蛋白
1．3．2 棒状体蛋白
1．3．3 致密颗粒蛋白
1．3．4 表面蛋白
1．4 新孢子虫在宿主机体内引起的免疫应答
1．5 犬新孢子虫诊断方法及相关抗原研究进展概述
1．5．1 根据临床症状和流行规律诊断
1．5．2 病理组织学诊断
1．5．3 血清学诊断
1．5．4 分子生物学诊断
1．6 噬菌体展示技术的原理及应用
1．7 研究的目的和意义
2 材料
2．1 虫株及实验动物
2．1．1 虫株
2．1．2 菌种与质粒
2．1．3 实验动物
2．2 试验所用试剂与仪器
2．2．1 主要实验试剂
2．2．2 实验相关主要溶液配制
2．2．3 主要实验仪器与设备
2．2．4 主要的生物学软件
3 方法
3．1 新孢子虫的体外培养
3．2 新孢子虫的速殖子的纯化
3．3 新孢子虫速殖子总RNA的提取
3．4 新孢子虫速殖子mRNA的提取
3．5 cDNA的合成
3．5．1 cDNA的第一条链合成
3．5．2 cDNA的第二条链合成
3．5．3 双链cDNA的末端平端化
3．5．4 与EcoRⅠ／HindⅢ接头相连
3．5．5 产物的EcoRⅠ和HindⅢ消化
3．5．6 cDNA产物的分级分离
3．6 cDNA片段与载体臂相连接
3．7 噬菌体的体外包装
3．8 文库滴度的测定
3．9 文库中插入基因片段情况的鉴定
3．10 文库的扩增
3．11 Nc-1免疫小鼠和感染小鼠的血清制备及IgG的纯化
3．12 文库的筛选
3．13 筛选克隆的鉴定和分析
3．14 犬新孢子虫速殖子基因组提取
3．15 NcSAG1、NcSRS2基因的克隆及原核表达
3．15．1 引物的设计及克隆
3．15．2 重组质粒pMD18T-NcSRS2的构建
3．15．3 重组质粒pColdⅢ-NcSRS2的构建
3．15．4 NcSAG1、NcSRS2蛋白的表达纯化
3．16 NcSAG1、NcSRS2重组蛋白的抗原性鉴定
4 结果与分析
4．1 新孢子虫总RNA及mRNA的提取
4．2 新孢子虫文库滴度的测定
4．3 文库中插入基因片段情况的鉴定
4．4 Nc-1免疫小鼠和感染小鼠的血清制备及IgG的纯化
4．5 新孢子虫噬菌体文库的筛选结果
4．6 NcSAG1、NcSRS2重组蛋白的表达及抗原性鉴定
5 讨论
6 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
