基于WHO分类的犬、猫恶性肿瘤的临床病理学研究

摘要

犬猫恶性肿瘤的发病率呈高发趋势，近年关于肿瘤的世界卫生组织分类也在发生着调整，为了了解动物恶性肿瘤发生情况、发生因素及其分类原则，尽早的建立动物恶性肿瘤数据库，同时为人肿瘤的诊断提供参照。本研究主要以犬、猫为实验动物，依据最新WHO对恶性肿瘤的分类标准将研究的犬、猫病例具体分类。在犬猫的病例中通过石蜡切片的常规染色(H.E.染色)、免疫组织化学方法、IgH和TCR基因重捧、PCR扩增的方法进行了鉴别诊断。同时进行了犬、猫病例的比较，以及与人肿瘤的比较，通过对犬猫的恶性肿瘤的临床病理学诊断，找到基于新版WHO分类的犬猫恶性肿瘤的发病特点。
　　具体的内容如下:
　　(1)进行了犬、猫恶性肿瘤的流行病学调查，根据恶性肿瘤不同的组织发生进行了犬、猫恶性肿瘤的分类统计，在此同时对动物恶性肿瘤高发的乳腺癌和恶性淋巴瘤流行病学病因进行了分析。首先在调查的过程中确定犬、猫恶性肿瘤的组织发生并记录，在此过程中如有同种组织不同来源的恶性肿瘤取其生长更为优势，肿瘤恶化程度较高的来源为最后诊断进行记录。从年龄及性别、品种及遗传对肿瘤发生类型的影响，应用统计学的方法将最后诊断的恶性肿瘤进行统计，绘制成图表进行分析。
　　(2)在对全国搜集犬、猫恶性肿瘤组织发生归类的同时，记录每种恶性肿瘤的免疫组化表达情况，进而分析犬、猫恶性肿瘤的免疫组化特征。
　　(3)本研究以犬、猫恶性肿瘤病例为材料，依据新版的WHO肿瘤分类进行了细致的鉴别诊断，在此类鉴定中我们将犬猫的恶性肿瘤病例都详细的分类到WHO的具体类别，搜集病例覆盖动物肿瘤较普遍，在犬猫病例中都发现了较为罕见的病例。
　　(4)恶性肿瘤中以淋巴瘤病例为重点鉴别对象，应用多种方法进行鉴别诊断。首先根据其临床表现进行初步的判断，之后制作组织切片，应用石蜡切片的常规染色（H.E.染色）和免疫组织化学方法进行深入的诊断，在犬、猫恶性淋巴瘤病例的检测中本研究除免疫组化和HE染色外还应用了基因重排和PCR扩增的方法进行鉴别诊断。基因重排依据淋巴细胞的表面具有与抗体或者是抗原特异性结合的能力的这样一类具有多个糖蛋白，这些糖蛋白是由亚单位组成的，其中包括由B淋巴细胞和T淋巴细胞产生的IgH与IgL以及T细胞受体(TCR)，一般由可变区（V区）、多变区（D区）、连接区（J区）及恒定区（C区）构成。淋巴系统内的造血细胞在其分化初期出现的克隆性增生即为淋巴恶性肿瘤，而其基因标志为Ig和TCR的重排。因此可以应用基因重排的方法进行检测。
　　综上所述，本研究得到了如下的结果:犬的皮肤及软组织恶性肿瘤的发病率居于犬恶性肿瘤疾病的首位，其次是乳腺癌，淋巴瘤患猫的比例较高，其次为皮肤及软组织肿瘤和乳腺癌。犬、猫恶性淋巴瘤为淋巴造血组织发生中高发病率的恶性肿瘤，以及其在性别、年龄等方面的差异。恶性组织细胞瘤、恶性脑膜瘤分别为犬、猫间叶组织发生、神经组织发生高发的恶性肿瘤。在免疫组化方面，上皮组织发生的肿瘤多表达角蛋白等，间叶组织多表达波形蛋白等。恶性淋巴瘤中B细胞淋巴瘤免疫组化诊断B系标记阳性，如CD20等。bcl-2滤泡性淋巴瘤阳性，如CD10阳性。其他组织发生的肿瘤可见其特异的表达分子，还找到了在肿瘤中起到鉴别诊断的免疫标记分子。在将犬、猫恶性肿瘤与人进行比较的过程中，发现免疫组化与病理变化与人有高度的相似。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 动物肿瘤概述

1．1．1 皮肤肿瘤研究进展

1．1．2 乳腺肿瘤的研究进展

1．1．3 淋巴瘤研究进展

1．2 肿瘤诊断方法概述

1．2．1 免疫组化技术

1．2．2 分子生物学技术

1．2．3 流式细胞技术

1．2．4 基因重排技术

1．3 肿瘤的流行病学

1．4 WHO肿瘤的病理学分类新进展

1．5 研究的目的与意义

1．6 研究内容及技术路线

2 材料与方法

2．1 实验主要仪器与试剂

2．1．1 病料来源

2．1．2 实验主要仪器

2．1．3 实验主要试剂

2．2 实验方法

2．2．1 病理切片的制备

2．2．2 病理组织学观察

2．2．3 免疫组化方法

2．2．4 基因重排检测方法

2．2．5 数据分析

3 实验结果与分析

3．1 恶性肿瘤的流行病学分析

3．1．1 犬恶性肿瘤的流行病学分析

3．1．2 猫恶性肿瘤的流行病学分析

3．2 恶性肿瘤的组织来源分类统计

3．2．1 犬肿瘤的组织来源分类统计

3．2．2 猫肿瘤的组织来源分类统计

3．3 典型病例分析

3．3．1 犬常见肿瘤依据WHO分类的病理组织学分析

3．3．2 猫犬常见肿瘤依据WHO分类的病理组织学分析

4 讨论

4．1 犬、猫肿瘤流行病学分析

4．1．1 年龄及性别对肿瘤发生的影响

4．1．2 品种及遗传对肿瘤发生类型的影响

4．1．3 与人流行病学比较分析

4．2 病理组织学及免疫组化分析

4．2．1 犬、猫乳腺癌病理组织学及免疫组化分析

4．2．2 犬、猫恶性组织细胞瘤病理组织学及免疫组化分析

4．2．3 犬、猫典型病例肺癌、平滑肌肉瘤病例讨论

4．3 犬淋巴瘤病例及与猫淋巴瘤比较讨论

4．3．1 淋巴瘤的病理变化

4．3．2 本研究犬代表病例比较

4．3．3 淋巴瘤基因重排检测特点

4．4 不同类型的肿瘤建立的诊断方法不同

5 结论

致谢

参考文献

攻读博士学位期间发表的学术论文