硒对铅引起鸡肠道毒性的缓解作用

摘要

铅(Pb)在工业中应用范围广，对环境有严重污染，对人类和动物的机体有毒害作用。目前，我国一些地区有Pb污染饲料继而污染家畜的案例，国外也有报道指出Pb能污染野生鸟类，Pb在动物体内的沉积会对动物健康产生伤害，甚至会导致动物Pb中毒。硒(Se)是动物体内必需微量元素，对铅中毒有缓解作用。本试验旨在讨论硒对铅中毒引起的鸡肠道炎症因子、热休克蛋白mRNA表达和氧化应激的缓解作用，为鸡肠道Pb中毒的诊断提供参考。
　　本试验将180只1日龄的海蓝蛋公鸡，预饲7天后随机分为对照组，Se组，Pb组，Se+Pb组，每组45只鸡。对照组饲喂商品日粮(含Se0.49mg/kg)和正常饮水;Se组饲喂添加Na2SeO3的商品日粮和正常饮水，加Se日粮在原商品日粮基础上添加到1mg/kg;Pb组饲喂商品日粮和添加(CH3COO)2Pb的饮水，Pb添加量为350mg/L; Se+Pb组饲喂加添加Na2SeO3的日粮和添加(CH3COO)2Pb饮水。分别在30天，60天，90天屠宰，取其空肠、回肠、十二指肠，检测NF-κb、COX-2、TNF-α、PTGEs、iNOS、HSP27、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90 mRNA表达量，H2O2、 NO、MDA、GSH含量及iNOS、GSH-st、GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT活性和组织学检测。实验结果表明:
　　(1) Pb中毒诱导鸡肠道NF-κb、COX-2、TNF-α、PTGEs、iNOS mRNA表达量和NO、含量、iNOS活性升高，并对其有时间效应，引起鸡肠道炎症反应和炎症损伤。
　　(2) Pb中毒引起鸡肠道HSP27、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90mRNA表达量降低。
　　(3) Pb中毒使鸡肠道H2O2、MDA含量升高，GSH含量、GSH-st、GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT活性下降，引起鸡肠道氧化应激。
　　(4) Pb中毒可以引起鸡肠道组织学的变化。
　　(5) Se对Pb中毒引起的鸡肠道炎症损伤和氧化应激有缓解作用，且能上调Pb中毒引起的鸡肠道热休克蛋白mRNA表达的降低。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 铅污染

1．2 铅中毒

1．3 炎症因子在毒理学中的研究进展

1．4 热休克蛋白在毒理学中的研究进展

1．5 抗氧化指标在毒理学中的研究进展

1．6 硒

1．7 研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 动物模型

2．2 试验主要仪器与试剂

2．2．1 主要仪器

2．2．2 主要试剂

2．3 组织样本采集

2．4 荧光定量PCR

2．4．1 引物设计与合成

2．4．2 总RNA提取

2．4．3 样品反转录

2．4．4 荧光定量PCR

2．5 试剂盒的检测

2．6 组织形态学观察

2．7 统计分析

3 结果与分析

3．1 炎症因子结果与分析

3．1．1 NF-κB mRNA表达结果与分析

3．1．2 COX-2 mRNA表达结果与分析

3．1．3 PTGEs mRNA表达结果与分析

3．1．4 TNF-α mRNA表达结果与分析

3．1．5 iNOS mRNA表达结果与分析

3．2 热休克蛋白结果

3．2．1 HSP27mRNA表达结果与分析

3．2．2 HSP40mRNA表达结果与分析

3．2．3 HSP60mRNA表达结果与分析

3．2．4 HSP70mRNA表达结果与分析

3．2．5 HSP90mRNA表达结果与分析

3．3 NO含量与iNOS活性结果与分析

3．4 抗氧化指标结果与分析

3．4．1 H2O2含量结果与分析

3．4．2 GSH含量、GSH-Px和GSH-st活性结果

3．4．3 MDA含量、SOD活性、CAT活性、T-AOC水平结果

3．5 组织学检测结果

3．5．1 空肠组织形态学结果

3．5．2 回肠组织形态学结果

3．5．3 十二指肠组织形态学结果

4 讨论

4．1 铅中毒对炎症因子mRNA表达量的影响

4．2 铅中毒对热休克蛋白mRNA表达量的影响

4．3 铅中毒对抗氧化指标的影响

4．3．1 铅中毒对H2O2、NO含量和iNOS活性的影响

4．3．2 铅中毒对GSH、GSH-st、GSH-Px的影响

4．3．3 铅中毒对MDA、SOD、CAT、T-AOC的影响

4．4 铅中毒对组织形态学的影响

4．5 硒对铅中毒的拮抗作用

4．5．1 硒对铅中毒诱导炎症因子表达的拮抗作用

4．5．2 硒对铅中毒诱导热休克蛋白表达的拮抗作用

4．5．3 硒对铅中毒诱导抗氧化指标变化的拮抗作用

4．5．4 硒对铅中毒引起鸡肠道组织学形态变化的拮抗作用

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文