核受体应答在阿特拉津致鹌鹑大脑线粒体损伤中的作用

摘要

阿特拉津(ATR)是世界上应用最普遍的除草剂之一，由于其化学稳定性和残留持久性，经常在河流和土壤中被检测到，导致潜在的生态危害。ATR能通过氧化应激产生动物和人的广泛毒性，然而ATR引起的神经毒性机制还不清楚。为了探究ATR对鹌鹑大脑的毒性作用，对雄性鹌鹑进行ATR染毒后，观察大脑组织病理学与超微结构变化、检测线粒体功能相关分子、NXRs、CYP450s稳态、抗氧化功能、线粒体自噬等相关指标。结果表明:
　　1.ATR引起鹌鹑大脑组织病理学与超微结构损伤，表明ATR能导致鹌鹑大脑组织损伤。
　　2.250 mg/kg和500 mg/kg ATR组能干扰线粒体功能相关基因（RAF1、COA6、CYCS、SIRT1、SIRT3、TFAM、NRF1、VADC-1、PRDX3）的正常表达，上调线粒体自噬相关基因Pink1和Parkin的表达，表明ATR能引起线粒体功能障碍，启动线粒体自噬。
　　3.ATR能够增加大脑组织中H2O2与MDA含量，抑制T-SOD、GST与CAT活性，降低T-AOC水平，诱发抗氧化功能损伤，表明氧化应激可能是ATR致鹌鹑大脑组织线粒体损伤的机制之一。
　　4.ATR能激活大脑组织中外源化合物敏感性核受体AHR/CAR/PXR转录，激活由其介导的核受体应答，改变CYP450s亚基表达水平，提高CYP450与Cyt b5含量，影响ERND、APND、AH、NCR酶活性，表明AHR/CAR/PXR介导的核受体应答与CYP450s稳态调控是ATR致鹌鹑大脑毒性的重要机制。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1．2 ATR应用现状

1．1．3 ATR环境危害

1．1．4 ATR生物毒性作用

1．2 ATR神经毒性

1．2．1 ATR神经毒性效应

1．3 氧化应激的概述

1．3．1 ATR与氧化应激

1．3．2 氧化应激在神经毒性中的作用

1．4 NXRs应答和CYP450s

1．4．1 NXRs的概述

1．4．2 CYP450s概述

1．4．3 NXRs和CYP450s相互关系

1．4．4 ATR与NXRs应答

1．5．1 线粒体损伤致神经毒性

1．5．2 ATR与线粒体损伤

1．6．2 Pink1／Parkin通路介导线粒体自噬作用机制

1．7 试验的目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验药品

2．2 主要仪器

2．3 试验设计方法

2．3．1 动物饲养及染毒方法

2．3．2 样品采集与处理

2．4 鹌鹁大脑组织中病理学观察

2．4．1 鹤鹑大脑组织中璃理组织学的观察

2．4．2 鹌鹁大脑组织中超微结构的观察

2．5 鹌鹁大脑组织中线粒体功能相关基因mRNA表达的测定

2．5．1 引物的设计与合成

2．5．2 总RNA的提取

2．5．3 反转录反应

2．5 4荧光定量PCR反应

2．6 鹌鹁大脑组织中线粒体自噬相关基因mRNA表达水平测定

2．7 鹌鹁大脑组织中抗氧化功能的测定

2．7．1 大脑组织中MDA含量测定

2．7．3 大脑组织中T-AOC的测定

2．9 鹌鹁大脑组织中CYP450s亚型mRNA表达水平测定

2．10 鹌鹁大脑组织中NXRs基因表达水平测定

2．11 试验数据的统计分析

3 结果

3．1．1 大脑病理组织学观察

3．1．2 大脑病理超微结构观察

3．2 ATR对鹌鹁大脑组织线粒体功能相关分子表达影响

3．3 ATR对鹌鹑大脑组织线粒体自噬相关分子表达影响

3．4 ATR对鹌鹁大脑组织抗氧化功能影响

3．5 ATR对鹌鹑大脑组织CYP450酶活性和含量影响

3．6 ATR对鹌鹁大脑组织CYP450s基因表达的影响

3．7 ATR对鹌鹁大脑组织AHR／PXR／CAR表达的影响

3．8 ATR对鹌鹑大脑组织NXRs和CYP450s mRNA表达变化的主成分分析

4 讨论

4．1 ATR致鹌鹑大脑组织病理学损伤

4．2 ATR致鹌鹁大脑组织线粒体损伤

4．2．1 ATR致鹌鹑大脑组织线粒体功能障碍

4．2．2 ATR致鹌鹑大脑组织线粒体自噬启动

4．3 ATR致鹌鹑大脑组织氧化损伤

4．4 ATR致鹌鹁大脑组织NXRs应答的影响

4．4．1 ATR致鹌鹑大脑组织CYP450s活性紊乱

4．4．2 ATR激活NXRs调控CYP450s基因水平表达变化

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文