声明
摘要
1前言
1．1纤维素的概述及其应用
1．1．2纤维素在畜牧业中的利用及优势
1．2纤维素酶的概述及研究进展
1．3蛋氨酸、赖氨酸与亮氨酸的物化性质及其在畜牧产业中的研究与已得到的应用
1．3．1蛋氨酸、赖氨酸与亮氨酸的简介
1．3．2蛋氨酸、赖氨酸与亮氨酸在畜牧饲料上的研究应用
1．4益生菌的概述及应用
1．4．1益生菌的概念与分类
1．4．2益生菌的作用及其在畜牧上的应用
1．5枯草芽孢杆菌的概述及在畜牧业上的应用
1．5．1枯草芽孢杆菌的背景资料介绍
1．5．2枯草芽孢杆菌在畜牧业中的应用
1．6转基因枯草芽孢杆菌的研究进展
1．7试验目的及意义
2材料与方法
2．1试验材料
2．1．1试验载体菌种
2．1．2常用培养基
2．1．3主要试验药品
2．1．4主要试验仪器
2．1．5主要试剂和缓冲液的配制
2．1．6引物设计
2．2试验方法
2．2．1益生菌样品的菌种的分离纯化与鉴定
2．2．2枯草芽孢杆菌发酵牧草样品中纤维素、半纤维素和木质素降解能力的检测
2．2．4添加牧草样品与未添加样品发酵后发酵液总蛋白含量的检测
2．2．5培养基发酵后发酵液中Met、Lys和Leu含量的检测
2．2．6纤维素酶基因的获取
2．2．7枯草芽孢杆菌表达载体的构建、转化及阳性重组子鉴定
2．2．8重组质粒在枯草芽孢杆菌中目的基因mRNA水平的表达
2．2．9重组质粒在枯草芽孢杆菌中目的基因蛋白水平的表达
2．2．10重组枯草芽孢杆菌及野生菌株传代稳定性和生长曲线的测定
3结果与分析
3．1枯草芽孢杆菌菌种的分离纯化与鉴定
3．1．1益生菌菌种的分离、纯化与初步鉴定
3．1．2 PCR特异引物扩增法对已获取益生菌菌种的种属鉴定
3．2枯草芽孢杆菌降解纤维素作用的分析
3．2．1枯草芽孢杆菌对纤维素、半纤维素和木质素的降解能力的检测
3．2．2枯草芽孢杆菌降解纤维素、半纤维素和木质素的酶活力的检测
3．2．3添加牧草样品与未添加样品发酵后发酵液总蛋白含量的比较
3．2．4添加牧草样品与未添加样品发酵后发酵液中Met、LyS和Leu含量的比较
3．3纤维素酶基因的获取
3．4枯草芽孢杆菌中重组表达载体构建与鉴定
3．4．2重组质粒pHT43-CE的验证
3．5枯草芽孢杆菌重组载体的转化及基因表达能力的检测
3．5．1枯草芽孢杆菌重组质粒的转化与鉴定
3．5．2枯草芽孢杆菌重组载体mRNA水平的表达检测
3．5．3枯草芽孢杆菌重组载体蛋白水平的表达检测
3．6枯草芽孢杆菌重组质粒的稳定性检测
3．6．1枯草芽孢杆菌重组菌与野生菌株的生长曲线的检测与比较
3．6．2枯草芽孢杆菌重组菌的传代稳定性检测
3．7重组枯草芽孢杆菌降纤维素解能力提升情况的检测
3．7．1重组枯草芽孢杆菌的纤维素降解能力提升情况
3．7．2枯草芽孢杆菌重组菌的纤维素酶活力的检测
4讨论
4．1益生菌的PCR菌种鉴定
4．2枯草芽孢杆菌降解纤维素作用的分析
4．3纤维素酶基因的获取
4．4重组表达载体的构建
4．5重组载体在枯草芽孢杆菌中的表达情况
5结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
