声明
摘要
1前言
1．1植物启动子
1．2植物启动子的结构特点
1．3启动子的分类
1．3．1组成型启动子
1．3．2诱导型启动子
1．3．3组织特异性启动子
1．4启动子的克隆方法
1．4．1利用启动子探针载体筛选启动子
1．4．2利用PCR技术克隆启动子
1．5启动子功能研究方法
1．5．1点突变分析
1．5．2凝胶阻滞分析
1．5．3瞬间表达分析
1．6 WRI1基因的研究进展
1．7本研究的目的与意义
1．8技术路线
2材料与方法
2．1试验材料和试剂
2．1．1植物材料
2．1．2菌种及载体
2．1．3主要试剂
2．1．4主要仪器
2．2试验方法
2．2．1 GmWRI1a基因启动子及缺失片段的克隆
2．2．2 GmWRI1a基因启动子全长序列分析
2．2．3植物表达载体转化农杆菌
2．2．4农杆菌介导花序浸泡法转化拟南芥
2．2．5 GUS基因在转基因拟南芥植株中的检测
2．2．6转基因拟南芥的激素和逆境处理
2．2．7大豆DN47植株的激素处理
2．2．8 qRT-PCR测定不同处理下大豆GmWRI1a基因的表达
3结果与分析
3．1．2大豆GmWRI1a基因启动子顺式作用元件分析
3．2大豆GmWRI1a基因启动子植物表达载体构建及转化拟南芥的鉴定
3．2．3 pBI121GmWRI1a∷GUS转化拟南芥及鉴定
3．3大豆GmWRI1a基因启动子缺失片段的克隆及转化拟南芥的鉴定
3．3．2大豆GmWRI1a基因启动子缺失片段植物表达载体构建
3．3．3大豆GmWRI1a基因启动子缺失片段表达载体转化农杆菌
3．3．4大豆GmWRI1a启动子缺失片段表达载体转化拟南芥
3．3．5核心启动子的确定
3．4 GmWRI1a基因全长及各缺失片段启动子的功能分析
3．4．1标准曲线的确定
3．4．2转基因拟南芥激素处理下的GUS酶活性检测
3．4．3转基因拟南芥逆境胁迫下的GUS酶活性检测
3．5 GmWRI1a基因在大豆植株不同激素处理下的表达量分析
3．5．2乙烯(ETH)对GmWRI1a基因表达量的影响
3．5．3茉莉酸(JA)对GmWRI1a基因表达量的影响
4讨论
4．1启动子研究方法
4．2 GmWRI1a基因启动子的序列分析
4．3 Gm WRI1a基因的功能分析
5结论
参考文献
致谢
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
