北五味子甲、乙素的遗传变异及基于ISSR标记的遗传变异研究

摘要

本研究对分布于我国东北三省的16个种源的北五味子的甲素和乙素含量进行了测定，并运用ISSR分子标记技术对各种源的遗传变异进行了研究，通过Popgen32软件对ISSR产物的扩增谱带进行分析，用Mega2软件画出遗传关系树状图，得到以下结果： (1)16个种源的北五味子果实的甲素以及乙素含量之间差异均达到极显著，甲素和乙素含量最高的为柳河种源；甲素和乙素含量最低的是敦化种源，甲素、乙素含量最高的种源是最低的种源的2.14倍和3.3倍。北五味子果实的甲素含量随着纬度的增加而降低；在温度低、降水少的地区，北五味子甲素的含量低。北五味子果实的乙素含量与地理气候因子之间无明显的相关性。实验结果表明，黑龙江省的苇河和吉林省的柳河为最佳种源。 (2)利用6个ISSR随机引物对16个种源的北五味子进行了PCR扩增，共检测到83个多态位点，多态位点百分率在9.64～42.17％之间，东方红种源的多态位点百分率最高，虎林种源的多态位点百分率最低。 (3)本次研究利用Shannon指数与Nei指数估算出北五味子的遗传变异，北五味子遗传多样性Nei指数H*的变化范围在0.0399～0.1254之间，北五味子遗传多样性Shannon指数I*的变化范围在0.0583～0.1966之间，东方红是遗传变异最高的种源，虎林是遗传变异最低的种源。 (4)16个种源的北五味子的基因多样性(Ht)为24.05％，其中种源内基因多样性(Hs)为7.98％，种源间基因多样性(Dst)为16.07％，北五味子种源的遗传分化系数(Gst)为0.6681，即种源间变异占总变异的66.81％。 (5)采用Mega2软件构建了16个种源北五味子的亲缘关系聚类图，在0.09的遗传距离上将16个种源北五味子分为五个类群，即：类群1为：东方红、清原、虎林、敦化、延吉、方正、珲春、辉南；类群2为：安图、草河口、沾河；类群3为：郎乡、汪清；类群4为：集安；类群5为：尚志、柳河。

目录

文摘

英文文摘

1绪论

1.1 DNA分子标记技术在药用植物上的研究进展

1.1.1近缘及易混淆品种的鉴定

1.1.2药用植物道地性的鉴定

1.1.3药用植物的DNA特征指纹的鉴定

1.2五味子简介

1.2.1五味子的化学成分

1.2.2五味子的药理作用及和医疗保健作用

1.3五味子的引种与栽培

1.4分子标记技术在五味子研究上的进展

1.5本项研究的目的和意义

2北五味子甲、乙素含量遗传变异分析

2.1仪器与试剂

2.2实验材料与方法

2.2.1材料

2.2.2样品的制备及测定

2.2.3数据处理及分析

2.2.4标准曲线的绘制

2.3结果与分析

2.3.1 16个种源的五味子甲、乙素含量的差异显著性分析

2.3.2各种源五味子甲素、乙素含量的多重比较

2.3.3北五味子甲素、乙素含量的地理变异趋势

2.4讨论

2.5小结

3北五味子ISSR遗传变异分析

3.1材料和方法

3.1.1试验材料

3.1.2主要试剂

3.1.3 DNA的提取

3.1.4 DNA质量检测和浓度确定

3.1.5 ISSR-PCR反应体系的建立

3.1.6 ISSR-PCR数据的统计分析

3.2结果与分析

3.2.1多态位点比率

3.2.2有效等位基因数ne*

3.2.3利用Nei指数和Shannon指数估测北五味子遗传多样性

3.2.4北五味子种源间及种源内的遗传分化

3.2.5 16个种源北五味子遗传距离聚类

3.2.6遗传距离与地理距离的相关性

3.3讨论

3 3.1遗传多样性研究的意义

3.3.2北五味子DNA的ISSR指纹分析

3.3.3北五味子的遗传变异

3.3.4北五味子的聚类分析

结论

参考文献

附 录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢