耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学分型及同源性分析

摘要

目的：研究安徽省不同地区的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）分子流行病学特征及P-V杀白细胞素（Panton-Valetine leukocidin，PVL）分布情况，了解MRSA的同源性状况，对MRSA的分子流行病学分型方法进行评价，分析MRSA基因型分布与抗生素应用的关系，以指导临床用药及控制MRSA引起的感染，为临床对MRSA的防治提供依据。
　　方法：收集2006年至2008年安徽三家医院分离的非重复MRSA91株，用Vitek-32微生物分析仪检测MRSA的耐药性并分析其耐药模式；应用PCR技术进行PVL基因检测；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）、随机引物扩增多态性（RAPD）技术以及多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing，MLST）联合葡萄球菌mec基因盒（SCCmec）分型方法对其作分子流行病学分型和同源性分析。
　　结果：所有MRSA菌株对万古霉素、奎努普丁/达福普丁、利奈唑胺100％敏感；对其他抗菌药物有不同程度耐药。主要耐药模式为同时对红霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢唑林、克林霉素5种药物耐药。MRSA菌株的SCCmec分型以II型、III型为主，MLST分型共有13种ST型，其中ST239-MRSA-III型菌株（占43.55%）和ST5-MRSA-II（占30.65%）为优势克隆，另有两种型别为新型，经MLST官方网站确认后分别命名为ST1226和ST1296。RAPD分析分为7个主要型别，其中I型为优势型别；PFGE共有26个型别，36个亚型，主要PFGE型为A、B、R、I型等。
　　结论：三家医院MRSA分型及主要流行株存在差异，本省主要流行克隆为ST239-MRSA-III型菌株（Brazilian/Hungarian株）和 ST5-MRSA-II型菌株（NewYork/Japan株），PFGE分型结果显示ST5-MRSA-II型菌株（NewYork/Japan株）高度同源，而三家医院的ST239-MRSA-III型菌株（Brazilian/Hungarian株） PFGE分型同源性不高。MLST联合SCCmec、PFGE及RAPD分型方法均可很好地用于MRSA分子流行病学分析，MLST联合SCCmec和PFGE分型结果之间相关性较好。省立医院MRSA临床株与ICU监测株具有同源性，呈暴发流行。

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第一章 前言

第二章 材料

2.1菌株来源：

2.2 抗菌药物

2.3 主要试剂

2.4 主要仪器

2.5 引物设计与合成

第三章 方法

3.1MRSA鉴定和药物敏感性实验

3.2 DNA 模板的制备

3.3MRSA的RAPD分型

3.4MRSA的MLST联合SCCmec分型研究及PVL基因检测

3.5 MRSA的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型

3.6.PFGE、RAPD-PCR以及MLST联合SCCmec分型的分型结果评价

第四章 结果

4.1 MRSA鉴定和药物敏感性实验结果

4.2 MRSA的RAPD分型结果

4.3MRSA的MLST联合SCCmec分型研究及PVL基因检测

4.4 MRSA的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型结果

4.5 PFGE、RAPD-PCR以及MLST联合SCCmec分型等三种不同的分型方法区分系数结果

4.6结果分析

第五章 讨论

1.MRSA的耐药特点与SCCmec与PVL

2. MRSA的MLST联合SCCmec分型

3. RAPD分型

4.PFGE分型

5.分子流行病学分型方法的选择评价

第六章 结论

参考文献

附录一英文缩略词表

附录二主要试剂配制（PFGE实验）

附录四 综述: 金黄色葡萄球菌生物膜形成的基因调控机制