两种铁线莲植物组织培养的初步研究

摘要

东北铁线莲(Clematis mandshurica)和褐毛铁线莲（Clematis fusca）均是东北重要的野生铁线莲属植物，自身具有一定的观赏特性及药用价值，但目前对这两种铁线莲植物的研究较少，故通过科学有效的方法对两种野生铁线莲植物的种质资源进行保存将十分重要。本研究以当年生带芽茎段、不带芽茎段以及叶片为外植体，初步研究了两种铁线莲的组织培养过程，以期为野生铁线莲的快速繁殖推广提供基础资料。研究结果如下:
　　1.两种铁线莲带芽茎段诱导丛生芽的组织培养
　　(1)无菌体系的建立:外植体选用两种野生铁线莲带芽茎段，用0.1％升汞消毒时，效果好。
　　(2)取材季节:外植体取材的最佳季节是春季，外植体的萌发率最高，且其污染率较低。
　　(3)腋芽诱导萌发培养:褐毛铁线莲在MS+6-BA1.0 mg·L-l+NAA0.05 mg·L-1中萌发率最高，为93.33％。东北铁线莲在MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.01 mg·L-1时萌发率最高，为86.67％。
　　(4)萌发芽的继代增殖培养:褐毛铁线莲芽继代增殖的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1+KT1.0 mg·L-1，增殖系数为2.63。东北铁线莲芽基带增殖的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1，增殖系数为3.94。
　　(5)壮苗及生根培养:通过本试验，不添加任何激素的MS和1/2MS基本培养基均未能达到两种野生铁线莲丛生芽壮苗的效果，且未能找到适合两种铁线莲的生根培养基。
　　2.两种铁线莲茎段和叶片愈伤组织诱导的初步研究
　　(1)无菌体系的建立:外植体选用两种野生铁线莲的不带芽茎段及叶片，两种铁线莲不带芽茎段用0.1％升汞消毒5min时，效果好;叶片用0.1％升汞消毒3min时，效果好。
　　(2)不同激素组合对愈伤组织诱导的影响:褐毛铁线莲不带芽茎段的愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1，诱导率为96.42％。东北铁线莲不带芽茎段的愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1，诱导率为80.77％。
　　(3)不同激素组合对愈伤组织增殖分化的影响:褐毛铁线莲茎间愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1，增殖率为52.17％;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1。东北铁线莲茎间愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.02 mg·L-1，增殖率为60.87％;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.02 mg·L-1。
　　(4)不同含量的活性炭(AC)以及继代周期对愈伤组织褐化的影响:两种铁线莲的活性碳的浓度在2.0g·L-1，继代时间为20天时，愈伤组织的褐化率最低。
　　(5)光照对叶片愈伤组织诱导的影响:光照条件有利于褐毛铁线莲叶片的愈伤组织诱导。
　　3.东北铁线莲愈伤组织生长周期中生理生化指标的变化
　　光照和黑暗条件下愈伤组织生长曲线均呈“S”型，生长曲线可以明显分为3个时期:延迟期(0-9d)，生长期(9-21d)，稳定期(21-27d)。过氧化物酶(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、可溶性蛋白质含量和可溶性糖含量的变化均与生长周期密切相关，同时受光照条件的影响。

目录

摘要

1 绪论

1．1 铁线莲的生物学特性

1．1．1 褐毛铁线莲

1．1．2 东北铁线莲

1．2 铁线莲属植物资源研究进展

1．2．1 种质资源调查

1．2．2 系统分类学研究

1．2．3 园林观赏及应用研究

1．2．4 化学成分及药理药效研究

1．3 铁线莲属植物栽培繁育概况

1．3．1 种子繁殖

1．3．2 扦插繁殖

1．3．3 组织培养和体细胞胚发生

1．4 植物组织培养技术研究进展

1．4．1 植物组织培养概述

1．4．2 植物组织培养的影响因素

1．5 研究的目的及意义

2 两种铁线莲带芽茎段诱导丛生芽的培养

2．1 试验材料与方法

2．1．1 试验材料

2．1．2 无菌体系的建立

2．1．3 取材季节

2．1．4 腋芽诱导萌发培养

2．1．5 萌发芽的继代增殖培养

2．1．6 壮苗培养

2．1．7 生根培养

2．1．8 培养条件

2．1．9 数据处理和统计分析

2．2 结果与分析

2．2．1 外植体灭菌时间的选择

2．2．2 不同取材季节对外植体培养的影响

2．2．3 不同激素组合对初代培养的影响

2．2．4 不同激素组合对继代增殖的影响

2．2．5 壮苗培养

2．2．6 生根培养基的选择

2．3 讨论

2．4 本章小结

3 两种野生铁线莲茎段和叶片愈伤组织诱导的初步研究

3．1 试验材料与方法

3．1．1 材料来源

3．1．2 无菌体系的建立

3．1．3 不带芽茎段和叶片愈伤组织的诱导培养

3．1．4 不带芽茎段愈伤组织的增殖分化培养

3．1．5 继代周期、活性炭的含量对愈伤组织褐化的影响

3．1．6 诱导愈伤组织的光暗条件的选择

3．1．7 数据处理和统计分析

3．2 结果与分析

3．2．1 外植体表面灭菌时间的选择

3．2．2 两种铁线莲茎段和叶片愈伤组织的形态观察

3．2．3 不同激素组合对愈伤组织诱导的影响

3．2．4 不同激素组合对愈伤组织增殖分化的影响

3．2．5 不同含量的活性炭以及继代周期对愈伤组织增殖褐化的影响

3．2．6 光照对愈伤组织诱导的影响

3．3 讨论

3．4 本章小结

4 东北铁线莲愈伤组织生长周期中生理生化指标的变化

4．1 材料与方法

4．1．1 实验材料

4．1．2 生长曲线的绘制

4．1．3 超氧化物歧化酶活性的测定

4．1．4 过氧化物酶活性的测定

4．1．5 可溶性蛋白含量的测定

4．1．6 可溶性糖含量的测定

4．2 结果与分析

4．2．1 生长曲线

4．2．2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化

4．2．3 过氧化物酶(POD)活性的变化

4．2．4 可溶性蛋白质含量的变化

4．2．5 可溶性糖含量的变化

4．3 讨论

4．4 本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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