蒺藜苜蓿E2F/DP基因鉴定及盐胁迫表达分析

摘要

多细胞生物的生长发育依赖于细胞分裂，而细胞分裂是由细胞周期精确调控的。细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性激酶形成的复合物推动进行细胞周期的有序进行，其核心是Rb/E2F/DP通路。
　　植物在盐胁迫下能够通过调控细胞周期来维持生长和发育，但其调控机制尚未研究透彻。本研究利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)和水稻（Oryza sativa）的E2F/DP基因作为参考序列，通过在蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）基因组中搜索和比对鉴定出5个E2F/DP基因，包含3个E2F基因、1个DP基因和1个DEL基因。蛋白质氨基酸结构分析显示，蒺藜苜蓿的E2F/DP蛋白质序列和拟南芥、水稻的E2F/DP蛋白在进化上保守。外显子和内含子的组成分析显示，在进化过程中，在Medtr;E2Fc和Medtr; DPa基因中的内含子分别有所增加和丢失。采用实时定量PCR方法对E2F/DP转录因子的基因表达模式进行分析显示，各基因在不同组织器官中的表达水平不一致，说明这些基因的表达具有组织特异性。这些基因响应NaCl处理的表达模式分析显示，在Jemalong A17盐耐受基因型响应盐胁迫时，E2F/DP复合物与DEL基因在其根和叶中可能发挥作用，但108-R盐敏感基因型应对盐胁迫时，E2F/DP复合物的功能有所丢失而由DEL基因进行补偿。本研究将有助于对E2F/DP转录因子的认识，并为进一步分析E2F/DP转录因子在盐胁迫下调控植物细胞周期的机制提供基础资料。

目录

摘要

1 绪论

1．1 细胞周期及其调控机制

1．2 E2F转录因子

1．3 盐胁迫对植物的影响

1．4 豆科模式植物蒺藜苜蓿

1．5 立题依据及目的意义

2 材料与方法

2．1 植物材料

2．2 盐胁迫处理

2．3 使用的软件及生物信息学分析软件

2．4 序列数据的获取

2．5 进化树分析

2．6 基因表达分析

2．6．1 总RNA提取

2．6．2 总RNA中DNA的消化处理

2．6．3 反转录cDNA第1链的合成

2．6．4 PCR扩增

2．6．5 实时荧光定量PCR

2．6．6 数据的分析与处理

3 结果与分析

3．1 蒺藜苜蓿E2F／DP基因序列的获得和聚类分析

3．1．1 蒺藜苜蓿E2F／DP基因序列的获得

3．1．2 蒺藜苜蓿E2F／DP蛋白的聚类分析

3．1．3 蒺藜苜蓿E2F／DP蛋白的结构域分析

3．1．4 蒺藜苜蓿E2F／DP基因编码区分析

3．1．5 小结

3．2 蒺藜苜蓿E2F／DP基因的表达分析

3．2．1 蒺藜苜蓿E2F／DP基因的组织特异性表达模式分析

3．2．2 Jemalong A17基因型植株中E2F／DP基因响应盐胁迫的表达模式分析

3．2．3 108-R基因型植株中E2F／DP基因响应盐胁迫的表达模式分析

3．3 小结

4 讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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