沙棘叶中主要黄酮类成分的提取富集工艺研究

摘要

本实验采用绿色新型的提取溶剂-低共熔溶剂对沙棘叶中五种主要黄酮类成分芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚和异鼠李素进行高效快速提取，研究了低共熔溶剂微波辅助提取工艺，并对工艺参数进行系统优化，同时结合大孔吸附树脂对提取液中的黄酮类成分进行分离富集，并对富集物进行了系统的抗氧化活性评估。本论文建立了一套高效、快速、准确检测沙棘叶中活性成分的分析检测方法和提取富集分离工艺，为合理开发和高效利用沙棘资源提供了必要的科学依据。具体研究结果如下:
　　1.建立了高效液相色谱同时分析检测沙棘叶中芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚和异鼠李素的方法:
　　色谱柱:KYA HIQ sil C18W column(250 mm×4.6 mm i.d.，5μm);流动相:乙腈(A)-0.4％磷酸水溶液(B);流速:1 mL/min;柱温:30C;检测波长:254 nm和370nm;进样量:5μL。梯度洗脱条件:0-7 min，10-15％(A);7-10 min，15-17％(A);10-25 min,17-17％(A);25-27 min,17-18％(A);27-31 min,18-19％(A);31-34 min,19-19％(A);34-38 min,19-26％(A);38-42 min,26-26％(A);42-55 min,26-50％(A);55-60 min，50-10％(A)。
　　2.对微波辅助低共熔溶剂提取沙棘叶中芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚和异鼠李素的条件进行了实验设计和工艺优化，确定了最优微波辅助低共熔溶剂提取的工艺参数:
　　低共熔溶剂:氯化胆碱/1，4-丁二醇=1/3（摩尔比，含水量为20％）
　　提取温度:64C
　　提取时间:18 min
　　液固比:20∶1 mL/g
　　在上述优化的条件下对沙棘叶进行提取，芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素的平均提取率分别为8.967 mg/g、1.809 mg/g、9.107 mg/g、0.448mg/g、0.489 mg/g，提取效果优于低共熔溶剂超声辅助提取和低共熔溶剂热回流辅助提取。
　　3.利用大孔吸附树脂对沙棘叶低共熔溶剂提取液进行富集分离，并对富集物的抗氧化活性进行了评价:
　　利用HPD-826，DM-130，D-3520，NKA-9，AB-8和D101六种型号的大孔吸附树脂直接富集分离低共熔溶剂提取液中的黄酮成分，其中AB-8型号树脂总体回收率最高，经AB-8型号大孔吸附树脂处理后，芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚和异鼠李素五种黄酮类成分的回收率分别为83.59％、74.46％、84.99％、72.36％和77.85％。此外，在沙棘叶提取物的抗氧化活性的研究中，经AB-8型号树脂富集出的提取物的抗氧化能力最强，在DPPH自由基清除能力实验中，测定抗氧化能力的IC50值为0.074 mg/mL;在ABTS自由基清除能力实验中，抗氧化能力的的测定值为0.662mmol/g Trolox;在还原力实验中，测定抗氧化能力的IC50值为0.127 mg/mL。
　　本研究对低共熔溶剂微波辅助提取沙棘叶中五种黄酮类成分的提取工艺进行了优化，并利用大孔吸附树脂直接对提取液进行了富集分离，并通过抗氧化活性评估筛选得到了抗氧化活性强的沙棘叶提取物，本研究对天然产物绿色高效提取和富集具有重要的理论价值，同时为沙棘叶合理开发利用提供了必要的科学依据。

目录

摘要

1 绪论

1．1 沙棘简介

1．1．1 沙棘的分布

1．1．2 沙棘的生物学特征

1．1．3 沙棘的主要化学成分

1．1．4 沙棘的药理作用和研究价值

1．2 微波辅助提取技术简介

1．3 低共熔溶剂研究进展

1．3．1 低共熔溶剂的性质及种类

1．3．2 低共熔溶剂的应用

1．4 大孔吸附树脂分离富集技术

1．5 抗氧化研究进展

1．5．1 抗氧化剂及其分类

1．5．2 抗氧化活性的测定方法

1．6 研究的目的和意义

2 沙棘叶中五种主要黄酮成分分析方法的建立

2．1 实验部分

2．1．1 实验仪器与试剂

2．1．2 标准溶液的配制

2．1．3 样品溶液的制备

2．2 结果与讨论

2．2．1 色谱条件的优化

2．2．2 沙棘叶样品溶液的测定

2．2．3 方法学验证

2．3 本章小结

3 沙棘叶中五种主要黄酮成分的提取工艺研究

3．1 实验部分

3．1．1 实验仪器与试剂

3．1．2 沙棘叶中活性成分的HPLC分析

3．1．3 提取率计算

3．1．4 低共熔溶剂的筛选与优化

3．1．5 低共熔溶剂微波辅助提取工艺参数的BBD实验

3．1．6 不同提取方法的比较

3．2 结果与讨论

3．2．1 不同低共熔溶剂体系的选择

3．2．2 组成比例的筛选

3．2．3 含水量的优化

3．2．4 低共熔溶剂微波辅助提取工艺参数优化实验结果

3．2．5 不同提取工艺的比较

3．3 本章小结

4 五种黄酮成分的富集分离工艺及其抗氧化活性评估

4．1 实验部分

4．1．1 实验仪器及试剂

4．1．2 大孔吸附树脂参数

4．1．3 大孔吸附树脂的预处理

4．1．4 大孔吸附树脂含水率的测定

4．1．5 HPLC分析方法

4．1．6 大孔吸附树脂对沙棘叶中五种主要黄酮成分的吸附性能研究

4．1．7 大孔吸附树脂对沙棘叶提取液中五种主要黄酮成分的富集分离

4．1．8 沙棘叶提取物抗氧化活性

4．2 结果与讨论

4．2．1 大孔吸附树脂对沙棘叶中五种主要黄酮成分的静态吸附和解吸

4．2．2 五种主要黄酮成分的富集分离结果

4．2．3 沙棘叶黄酮富集物的抗氧化活性

4．3 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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