山桐子果实油和种子油的提取及其剩余物抗炎作用研究

摘要

本文以山桐子果实为原料，在酶的辅助下利用有机溶剂对种子和果肉中油脂成分进行提取，同时，考察种子油和果实油提取过程中各因素对油脂得率的影响，并在单因素实验基础上，利用响应面法对油脂提取工艺进行优化，在优化后得到的最佳条件下对该工艺进行多次验证性实验。对提取油脂后剩余的籽珀和果肉渣再利用，提取其中的多酚成分并用于山桐子果实体内外抗炎活性研究。主要内容如下:
　　在单因素实验研究中，选取pH值、酶解时间(min)、酶解温度(℃)作为考察因素，比较油脂得率，并根据各影响因素下油脂提取结果利用响应面进行优化。得出最优提取工艺，并进行3次重复验证，种子油提取率为11.50％;果实油提取率15.46％。经验证结果与回归方程拟合度良好，因此，提取条件具有可靠性。
　　对甲酯化处理后的种子油和果实油进行GC/MS检测，鉴定其主要成分。分析得出山桐子种子油中主要成分有6种:肉豆蔻酸、反式棕榈酸、棕榈酸、亚油酸、油酸和硬脂酸;山桐子果实油中主要油酸有7种:反式棕榈酸、棕榈酸、亚油酸、油酸、硬脂酸、十烷酸和十二酸。
　　在酸化甲醇环境中分别对脱脂的籽珀和果肉渣中的多酚成分进行提取，以没食子酸为标准品检测籽珀多酚(SPP)和果肉渣多酚(FPP)的含量分别为4.74mg/g和6.60mg/g。并对LSP诱导的RAW264.7细胞给药后进行细胞活力和NO释放量的检测，结果表明给药浓度在50～200μg/mL时，随着浓度给药浓度的增加细胞活力值随之增大;细胞中亚硝酸盐含量降低，NO释放量减少，且给药浓度范围对细胞无毒副作用，该浓度可用作参考抗炎因子基因表达的作用。确定SPP与FPP的抗炎效果，根据半定量RT-PCR检测方法，以凝胶电泳成像光亮度判断基因表达，结果表明高剂量对iNOS、IL-6和TNF-α效果较为明显。
　　采用0.2％角叉菜胶注射大鼠足跖诱导急性炎症，在SPP、FPP、阳性对照和模型组的比较中发现:SPP和FPP在不同程度上对该法诱导的急性炎症都具有一定程度的抑制作用。

目录

摘要

1 绪论

1．1 山桐子研究概况

1．1．1 山桐子简介

1．1．2 山桐子生态学相关研究

1．1．3 山桐子油的研究现状

1．2 植物油提取方法

1．2．1 压榨法

1．2．2 溶剂法

1．2．3 超声辅助提取法

1．2．4 超临界CO2萃取

1．2．5 水酶法提取

1．3 多酚类物质概况及其活性

1．3．1 抗氧化活性

1．3．2 抗癌活性

1．3．3 其他生物活性

1．4 研究依据以及研究内容

1．4．1 研究依据

1．4．2 研究主要内容

2 响应面法优化酶辅助有机溶剂法提取山桐子种子油和果实油

2．1 实验材料与试剂

2．2 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 酶活力测定

2．3．2 原材料处理及最适酶的选择

2．3．3 酶辅助单因素实验设计

2．4 响应面法实验设计

2．5 最优工艺验证

2．6 实验结果分析

2．6．1 酶活力测定结果

2．6．2 最适酶的选择

2．6．3 酶辅助单因素实验结果

2．7 响应面分析

2．7．1 响应值拟合模型与方差分析

2．7．2 响应面分析及最佳油提取条件确定

2．8 最优工艺的验证

2．9 结果与讨论

2．10 本章小结

3 山桐子种子油理化性质及成分分析

3．1 种子油的理化性质

3．1．1 水分及挥发物测定

3．1．2 酸价测定

3．1．3 过氧化值测定

3．2 甲酯化反应

3．3 山桐子油脂气相色谱分析条件

3．4 种子油理化性质分析

3．5 GC-MS分析山桐子种子油和果实油中化学成分

3．5．1 种子油成分分析

3．5．2 果实油成分分析

3．6 结果与讨论

3．7 本章小结

4 山桐子籽珀、果肉渣多酚的提取及对LPS诱导RAW264．7细胞的抗炎研究

4．1 植物多酚的提取与含量测定

4．1．1 实验药品

4．1．2 实验仪器

4．1．3 植物多酚提取

4．1．4 总多酚含量测定

4．2 RAW264．7巨噬细胞培养及LPS诱导炎症

4．2．1 LPS诱导RAW264．7致炎

4．2．2 MTT比色实验

4．2．3 Griess试剂盒检测细胞分泌NO的影响

4．2．4 数据分析

4．3 SPP、FPP对RAW264．7炎症因子基因表达的影响

4．3．1 总RNA提取

4．3．2 RNA逆转录

4．4 结果与分析

4．4．1 山桐子籽珀、果内渣多酚含量测定

4．4．2 MTT比色实验检验细胞活力

4．4．3 细胞分泌NO的影响

4．4．4 SPP、FPP对RAW264．7炎症因子基因表达的影响

4．5 本章小结

5 SPP、FPP对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀程度影响研究

5．1 实验材料与动物

5．1．1 实验动物

5．1．2 实验药品与仪器

5．2 实验方法

5．3 数据分析

5．4 结果与讨论

5．5 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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