金银忍冬3种种质资源超低温保存的研究

摘要

金银忍冬[Lonicera maackii(Rupr.)Maxim.]是我国主要的园林绿化植物，具有较高的观赏价值，且具有一定的药用价值，开发利用前景较好，具有较高的保存价值。为了更好的保护以及合理的开发利用金银忍冬，本论文分别对金银忍冬的种子、花粉和茎尖3种种质资源形式进行超低温保存，通过比较测定超低温保存前后材料的活力变化以及与活力有关的生理指标的变化，从而探究出最佳保存种质资源的方法。其结果如下:
　　1.金银忍冬种子可以采用超低温保存的方式进行长期保存。由于其种子存在休眠状况，则在超低温保存前利用浓度为700mg/L的赤霉素浸泡种子24小时来打破休眠。当种子经超低温保存后，含水量为7％种子并采用缓冻快解的超低温处理方式后其种子发芽率可达89％;通过对种子的电导率、4种酶活性、以及3种渗透性物质含量的变化分析，最终筛选出金银忍冬种子超低温保存的最佳方案为:种子含水量保持在7％-11％的范围内并采用缓冻快解或快冻快解的处理方式进行超低温保存效果最佳。
　　2.金银忍冬的花粉可以成功进行超低温保存。本试验的花粉采用离体萌发法测定花粉生活力，研究花粉的不同采集时间、含水量、解冻方式及不同保存方法对其超低温保存效果的影响。结果表明:采集金银忍冬花粉的最佳时间为开花当天13:30左右;在超低温保存中，花粉以未干燥(含水量13.04％)、直接投入液氮、经15℃自来水解冻5分钟后保存效果最好，花粉萌发率能达81.9％。在360天的保存时间内，-196℃条件下保存的花粉具有较高的萌发率，而室温条件下的花粉迅速失活，4℃、-20℃、-80℃条件下的花粉活力都呈逐渐下降的趋势。
　　3.金银忍冬茎尖也可成功进行超低温保存。本试验主要建立了金银忍冬茎尖的超低温保存体系，主要步骤为先通过采集处在生长期未中空的茎段为材料，经消毒后进行培育成无菌苗，切取无菌苗中的2-3cm长的包含顶端茎尖的无菌茎段为预培养材料，置于4℃条件下的蔗糖浓度为0.3mol/L的预培养液中培养3天，再剥取2-3mm长的茎尖，随后用LS装载液处理40分钟，再在0℃条件下用PVS2溶液处理茎尖40分钟，更换新鲜的保护液后迅速直接投入液氮中。保存时间为24小时，取出含茎尖的冷冻管后在40℃水浴中解冻70秒，迅速用卸载液对其进行洗涤20分钟，每次10分钟，洗涤完毕后将茎尖接种在4号培养基上即MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA31.0mg/L，恢复培养的条件为25℃的黑暗环境下培养两周后再转入正常光照下进行培养，此时茎尖成活率最高可达73％。随后再利用金银忍冬茎尖组织培养体系将其直接培养成苗。

目录

摘要

1 绪论

1．1 植物种质资源研究现状

1．1．1 植物种质资源保存方法

1．1．2 忍冬属种质资源的研究现状

1．2．1 园林应用的研究

1．2．2 生物学的研究

1．2．3 栽培繁殖研究现状

1．2．4 组织培养的研究

1．2．5 药用价值及化学成分的研究

1．2．6 解剖学的研究

1．3 超低温保存研究进展

1．3．2 超低温保存的基本程序

1．3．3 超低温保存的主要材料

1．3．4 超低温保存的方法

1．3．5 超低温保存的影响因素

1．4 本研究的目的意义

2 金银忍冬种子超低温保存

2．1．1 试验材料

2．1．2 试验方法

2．2．1 发芽率分析

2．2．2 相对电导率分析

2．2．3 超氧化物歧化酶(SOD)活性分析

2．2．4 过氧化物酶(POD)活性分析

2．2．5 过氧化氢酶(CAT)活性分析

2．2．6 丙二醛(MDA)含量分析

2．2．7 可溶性蛋白含量分析

2．2．8 可溶性糖含量分析

2．2．9 α-淀粉酶活性分析

2．3 本章小结

3 金银忍冬花粉超低温保存

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验方法

3．2 结果与分析

3．2．2 金银忍冬花粉日活力变化的结果分析

3．2．3 不同解冻方式对金银忍冬花粉萌发率的影响

3．2．4 不同含水量的金银忍冬花粉超低温保存前后萌发率

3．2．5 不同保存方式对金银忍冬花粉萌发率的影响

3．3 本章小结

4 金银忍冬茎尖超低温保存

4．1．1 试验材料

4．1．2 试验试剂

4．2 试验方法

4．2．1 正交试验

4．2．2 无菌苗的获取

4．2．3 预培养

4．2．4 剥去茎尖

4．2．5 装载

4．2．6 脱水

4．2．7 液氮保存

4．2．8 解冻处理

4．2．9 恢复培养

4．3 结果与分析

4．3．1 正交试验结果

4．3．2 单因素试验

4．4 本章小结

5 讨论与建议

5．1 种子超低温保存

5．2 花粉超低温保存

5．3 茎尖超低温保存

5．4 建议

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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