人微小病毒B19-VP2基因真核表达质粒的构建

摘要

目的:该课题的目的是利用真核表达质粒pcDNA3.1为载体,将选择出的B19-VP2抗原表位丰富区基因片段重组其中,构建出pcDNA3.1-VP2重组表达载体,并将重组质粒免疫动物,观察其免疫效应,以探讨人微小病毒B19-VP2基因作为基因疫苗的可行性,为最终建立针对该病毒的特异性实用疫苗奠定基因.结论:该课题利用分子生物学软件分析出B19-VP2抗原表位丰富区,确定了9个抗原表位,主要集中于294-541位氨基酸序列中.利用分子生物学的方法,成功构建含B19-VP2基因的真核表达质粒pcDNA3.1-VP2.并通过免疫接种,在动物体内产生了较强的免疫应答.通过此项研究,为人微小病毒B19基因疫苗的研制奠定了坚实的基础,并为进一步研究基于VP2的表位生物学和表位疫苗提供了详实的数据.

目录

文摘

英文文摘

1前言

1.1基因疫苗的研究现状

1.2人微小病毒B19的致病性及生物学性状

1.3研究的目的、内容和意义

2实验材料

2.1 材料

2.2主要仪器设备

2.3实验中配制的主要试剂

3实验方法

3.1目的基因(B19-VP2)的克隆:

3.2目的基因(B19-VP2)的亚克隆

3.3.基因疫苗pcDNA3.1-VP2的大量制备和免疫活性测定

4实验结果

4.1表位分析结果

4.2靶基因扩增结果

4.3靶基因酶切鉴定结果:

4.4克隆和亚克隆重组子鉴定结果

4.5 pGEM-T-VP2和pcDNA3.1-VP2的序列分析结果

4.6 ELISA结果

5讨论

5.1 B19-VP2蛋白的表位

5.2真核表达载体的构建

5.3真核表达载体的表达

5.4构建pcDNA3.1-B19-VP2真核表达载体的意义

6结论

6.1 B19-VP2主要抗原表位的分析

6.2目的基因的克隆

6.3目的基因的亚克隆

6.4基因疫苗的免疫效应

参考文献:

综述人微小病毒B19研究进展

致谢