人胎脑神经干细胞植入新生鼠缺血缺氧性海马损伤区的研究

摘要

目的:将培养的人神经干细胞(neuralstemcells，NSC)移植至新生鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBI)的海马区，观察植入细胞的迁移及分化。探索缺血缺氧性脑病(HIE)的治疗方法。 材料与方法:1.细胞培养：取孕12周人胚胎脑组织，制备成单细胞悬液，接种于N2培养基中(D/F12+N2+B27)，细胞接种浓度为3～5×105/ml，培养基中添加表皮生长因子(EGF)20ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactorbFGF)10ng/ml、白血病抑制因子(LIF)10ng/ml,培养十天后，添加10％胎牛血清(fetalbovineserumFBS)诱导分化4-5天，形成含5-30个细胞的小神经细胞球。细胞球经低速离心浓缩，在N2培养基中调整细胞终浓度为5.0×104cells/ul，待移植时用。　　2.神经干细胞移植：SD新生大鼠(n=32)生后第7天进行HIBD模型制作，模型制作后3天予人NSC移植。准备移植的幼鼠麻醉后固定在立体定向仪上，人NSC注入左侧(损伤侧)海马区，注射位点如下：AP=-3mm，ML=-2.5mm，DV=-2mm。通过微量注射器注射2ul(细胞浓度为5.0×104cells/ul)。移植后动物不予免疫抑制剂。移植后1周、2周、4周及3月的鼠过量麻醉后，4％的多聚甲醛心脏灌注，取脑，石蜡包埋，冠状切片(5um)，用鼠抗－人细胞核蛋白(humannuclearprotein，hNuc)，兔抗－人神经丝蛋白(neurofilamentprotein，NF)和兔抗－人神经元特异性管蛋白(Tublin)、兔抗－人酸性胶质纤维蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)抗体行免疫组织化学染色。观察移植细胞的迁移及分化。

目录

文摘

英文文摘

郑重声明

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

综述(一):神经干细胞治疗缺血缺氧性脑损伤研究进展

综述(二):神经干细胞治疗脑室周围白质软化研究进展

缩略词组

致谢