互隔交链孢酚对NIH3T3细胞中DNA聚合酶β基因的致突变作用

摘要

目的：在于观察互隔交链孢酚对NIH3T3细胞中DNA聚合酶β基因突变的影响，探讨互隔交链孢酚致癌可能的机制，并为进一步研究polβ的生物学功能和特性研究提供实验依据。　　方法：将本研究室冻存的NIH3T3细胞复苏后培养，待其生长情况良好，用含有不同浓度的互隔交链孢酚(AOH)的培养液作用于NIH3T3细胞，分为五组：①正常细胞组；②AOH浓度为2μmol/L组；③AOH浓度为4μmol/L组；④AOH浓度为8μmol/L组；⑤AOH浓度为16μmol/L组。首先提取细胞的总RNA，用RT-PCR方法从细胞总RNA中扩增出DNA聚合酶β基因cDNA序列，应用T-A克隆技术，克隆至pGEM-Teasy载体后，选用JM109菌株，用氯化钙法制备感受态细菌，将目的基因转入宿主细菌内，蓝白筛选、通用引物扩增鉴定后，送上海生物工程公司进行测序，用DNASIS、OMIGA软件分析序列变化，与GenBank中DNA聚合酶β基因序列进行比较，分析蛋白质结构及其变化。同时从细胞总RNA中扩增出β-actin基因，将DNA聚合酶β的表达情况与β-actin表达情况进行比较，用半定量分析了解DNA聚合酶β表达量的变化。　　结论：AOH可导致NIH3T3细胞中的DNA聚合酶β发生点突变，AOH的作用浓度升高，DNA聚合酶β的表达量会增多，推测AOH的致癌作用可能与引发细胞中DNA聚合酶β基因突变和高表达有关。

目录

文摘

英文文摘

郑重声明

前言

实验材料

实验方法

实验结果

1.DNA聚合酶β基因扩增结果

2.DNA聚合酶β基因克隆后鉴定结果

3.DNA聚合酶β基因的序列分析结果

4.半定量分析结果

讨论

结论

参考文献

综述部分 DNA聚合酶β

参考文献

附录 主要英文缩写词表

致谢