枸杞多糖对小鼠骨髓来源的树突状细胞抗H22肝腹水瘤功能的影响

摘要

实验目的：抗原提呈细胞(antigenpresentingcells，APC)在机体的抗肿瘤免疫功能中起着非常重要的作用，因为免疫应答的产生首先必需由APC对外源性抗原进行捕获、加工和处理为免疫原性多肽，后者再与MHC(maiorhistocompatibilitycomplex)分子结合成复合物，共表达于APC表面，然后才‘能提呈给T细胞，由T细胞受体(Tcellreceptor，TCR)特异性识别抗原肽-MHC复合物后启动细胞内信号传递系统，进而诱导淋巴细胞活化、增生、分化，从而产生一系列免疫学效应。树突状细胞(dendriticcells，DC)是机体内一大类重要的专职APC，也是目前发现的体内抗原提呈功能最强的一类APC，它不仅能高水平表达MHC-I、II类抗原和多种共刺激分子，粘附分子以及高水平的Thl型细胞因子等，而且可以有效诱导巢居的静息性幼稚T细胞(naiveTcell)活化，诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTLymphocyte,CTL)生成。有研究表明，肿瘤细胞可以引起DC功能失常、凋亡以及免疫反应中信号传导障碍。肿瘤逃避免疫监视的机制之一就是肿瘤抗原的加工、提呈发生障碍，同时还发现在肿瘤机体内存在着Thl／Th2漂移，表现为Thl功能低下而Th2型细胞因子占优势的状态，造成机体的细胞免疫受到抑制。因此，肿瘤患者体内DC的生物功能状态对机体的特异性抗肿瘤免疫反应起着非常关键的作用。 枸杞子是常用的补益类中药，枸杞多糖(1yciumbarbammpolysaccharides，LBP)是其有效成分，具有抗肿瘤和抗衰老作用。本实验通过观察枸杞多糖对小鼠骨髓来源的DC的影响以及对荷瘤小鼠的免疫作用，从分子、细胞水平以及整体水平探讨了枸杞多糖提高机体免疫力机制。 实验方法：1．枸杞多糖体外干预对DC的影响：依赖于成熟的体外大量扩增培养小鼠骨髓来源的DC(BMDC)的技术，在DC的分化，成熟、活化这一系列过程中加入枸杞多糖观察其影响：在BMDC体外培养时加入低、中、高三种浓度的LBP(5μg／ml、10μg／ml、20ug／m1)处理，同时设生理盐水对照组，培养至第6d，以流式细胞仪(flowcytomcter,FCM)分析各组细胞的免疫表型及T细胞的增殖情况；用Western-Blot方法测定其分泌的白介素．12P40(interleukin-12P40，IL一12P40)水平；MTT法检测体外经冻融的H22肝癌细胞冲击后的DCs刺激同种反应性T细胞的杀伤活性。 2．枸杞多糖体内干预对荷瘤小鼠免疫功能的影响：昆明小鼠80只，随机分成8组，设荷瘤组4组(每组n=lO)，从左下腹腔注射200μL的H22肝腹水瘤细胞(1×10。个／mi)，24h后分别以5、10、20mg／kg．d剂量的LBP和等量生理盐水(NS)灌胃小鼠，纪录各组小鼠成瘤期以及生存期；另设4组(每组n=lO)分别以5、10、20mg／kg．d剂量的LBP和等量生理盐水灌胃荷H22肝癌小鼠，连续喂养15d，第15天时拉颈处死各小鼠，分别计算其胸腺指数和脾指数；分离小鼠骨髓DC，流式细胞术检测CD86、CDlla表达情况；诱导培养脾脏T淋巴细胞，MTT法检测其杀伤H22肿瘤细胞情况。 采用统计软件包SPSSl0．0进行统计学分析(多个样本均数采用ANOVA分析，小鼠成瘤期和荷瘤小鼠生存期用Kaplan—Meier法及Log～Rank检验)，统计学结果用x±s表示，显著性水准为P0．05)。 2．枸杞多糖体内干预可以延缓荷H22肝癌细胞小鼠的成瘤期(以腹水出现为标准；加药组与NS组相比，差异有统计学意义，P0．05)；喂药组BMDC高表达CD86和CDlla(与NS组相比，P<0．05,其中以10mg／kg．d喂养最为显著)；喂药组T淋巴细胞杀伤H22肿瘤细胞活性增强(与NS组相比，P<0．05，其中仍以10mg／kg．O喂养最为显著)。 实验结论： 1．LBP能够促进体外培养的DC的分化、成熟，提高其表面表达CD86(B7-2)以及CDlla(LFA．1)的水平；能够促进DC分泌IL-12P40；提高CTL的特异性杀伤能力。 2．LBP灌胃荷H22肝腹水瘤小鼠能够延长其成瘤时间以及生存时间，提高其脾指数和胸腺指数；能够促进DC的分化、成熟，提高其表面表达CD86(B7-2)以及CDlla(LFA-1)的水平；能够促进DC分泌IL．12P40；提高CTL的特异性杀伤能力。

目录

文摘

英文文摘

郑重声明

引言

实验材料

实验方法

实验结果

附图

讨论

小结

参考文献

植物多糖的抗肿瘤免疫作用及其对树突状细胞的影响

缩略语

致谢