实验性隐睾生殖细胞凋亡与Bcl-xl和Bad表达关系的研究

摘要

背景与目的：隐睾症是指睾丸位于肾脏和阴囊之间的任何位置。是小儿泌尿生殖系统的常见病，可能导致男子成年后不育。人类睾丸是一种具有高度增殖能力的组织，但成年人睾丸中产生的成熟精子的数量要比预计生成的精子数少20％～75％。大量研究表明睾丸中生精细胞这种自发性退化是通过凋亡而发生的。人类睾丸生殖细胞的凋亡是一个多基因参与的复杂的过程，其中Bcl-2/Bax基因家族、p53基因、CREM基因、Fas/Apo-1基因、HSP基因族以及c-myc基因等都在人类睾丸生殖细胞的凋亡过程中起到一定的作用。其中Bcl-2/Bax基因家族包含两类功能相反的基因，一类是抑制细胞凋亡的基因Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Bfl-1、Brag-1、Mcl-1和A1等，另一类是促进细胞凋亡的基因Bax、Bak、Bok、Bcl-xs、Bad、Bid、Bik、Blk和Hrk等。Bcl-xl、Bad是目前新发现的一组抑制、促进凋亡基因，在睾丸中的表达及调控机理，目前国内外未见报道。本文旨在从分子生物学角度探讨两种基因在实验性隐睾症生殖细胞凋亡中的作用。 方法将50只成年健康SD雄性大鼠随机分成实验性隐睾症组(n=23)和对照组(n=27)。建立右侧腹腔隐睾模型，术后第3天处死实验组7只大鼠和对照组9只大鼠，取实验组隐睾侧睾丸和对照组正常睾丸作研究对象。同理术后第7、10天处死实验组各8只大鼠和对照组各9只大鼠，取实验组隐睾侧睾丸和对照组正常睾丸作研究对象。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生殖细胞凋亡，免疫组化SABC法检测Bcl-xl、Bad基因表达。实验组与对照组比较采用t检验，实验组之间比较采用方差分析。生殖细胞凋亡指数与Bad/Bcl-xl、Bad和Bcl-xl作多重回归分析。以P＜0.05作为差异有统计学意义。 结果1.凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞。实验组生殖细胞凋亡指数高于对照组。术后3天组生殖细胞凋亡指数为5.54±1.93％，7天组为7.33±1.61％，10天组为9.48±2.96％，对照组为2.26±0.92％。实验组分别与对照组比较(P＜0.01)。实验组生殖细胞凋亡指数随术后时间延长而增加，术后3天组与术后7天组比较(P=0.723)。与术后10天组比较(P＜0.05)，术7后天组与术后10天组比较(P＜0.05)。 2.实验组Bcl-xl阳性表达率低于对照组，术后3天组为67.30±6.11％，7天组为54.00±8.75％，10天组为35.85±6.55％，对照组为76.00±6.83％。实验组分别与对照组比较(P＜0.01)。实验组Bcl-xl阳性表达率随术后时间延长而降低。术后3天组与术后7天组比较(P＜0.05)，与术后10天组比较(P＜0.01)。术后7天组与术后10天组比较(P＜0.01)。 3.实验组(3天组除外)Bad阳性表达率高于对照组。术后3天组为15.17±1.83％，对照组为13.88±3.58％。二组相比(P=0.46)。术后7天组为46.22±9.30％，10天组为46.22±9.30％，对照组为13.88±3.58％。术后7、10天组分别与对照组比较均是(P＜0.01)。实验组之间比较，术后3天组与术后7天组比较(P＜0.01)，与术后10天组比较(P＜0.01)。术后7天组与术后10天组比较(P=0.344)。 4.生殖细胞凋亡指数AI(Y)与Bad/Bcl-xl(X1)、Bad(X2)和Bcl-xl(X3)作多重回归分析R=0.787F=29.383P=0.000表明从整体而言三个自变量构成的回归方程解释AI变化与三个自变量相关是有统计学意义的。Y=0.072+0.026X1+0.010X2-0.059X3P＞0.05表明与三个因素不是线性关系。Bad/Bcl-xl与细胞凋亡指数呈直线回归关系(Y=0.02835+0.04937X1F=29.383P＜0.01。) 结论1.对照组生殖细胞凋亡较少。实验组生殖细胞凋亡随着术后时间的延长而增加。 2.对照组生殖细胞Bcl-xl基因呈高表达，实验组生殖细胞Bcl-xl呈低表达，且表达逐渐降低。 3.对照组生殖细胞Bad基因呈低表达，实验组(3天组除外)生殖细胞Bad基因呈高表达。 4.Bad/Bcl-xl比例在促进生殖细胞凋亡中起的作用更显著。

目录

郑重声明

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附录一实验图片

隐睾症与细胞凋亡、Bcl-xl和Bad基因的研究进展

缩略语

致谢

附录二读研期间发表的论文