四环素多克隆抗体的制备及丁胺卡那霉素酶联免疫检测的初步研究

摘要

四环素和丁胺卡那霉素分别属于四环素类和氨基糖苷类抗生素，目前在兽药上应用十分普遍。并且两者在畜禽食品中的残留都会引起一系列后果。酶联免疫检测法(ELISA)是一种简便、快速，并非常适合大规模样品筛选的检测方法，但国内主要依靠价格昂贵的进口试剂盒。研制自主产权的快速检测ELISA试剂盒，已成为当务之急。因此，针对二者残留的快速检测方法的建立对控制动物性食品的质量等方面具有重要的社会和经济利益。 本论文旨在建立畜禽产品中四环素和丁胺卡那霉素残留的间接竞争酶联免疫吸附(Ci-ELISA)检测方法。研究内容和结果如下： 1.四环素和丁胺卡那霉素人工抗原的合成及鉴定。通过碳二亚胺法合成了两种药物的免疫原和包被原，并用紫外和动物免疫的方法进行了验证，均证明了人工抗原合成成功。 2.四环素鼠多抗的制备和丁胺卡那霉素兔多抗的制备及鉴定。通过实验，结论如下：四环素鼠多抗终点效价在1：80000左右，小鼠产生了抗四环素的特异性抗体；丁胺卡那霉素兔多抗的终点效价在1：600000万左右，两只兔子均产生了针对丁胺卡那霉素的抗体。 3.通过对丁胺卡那霉素间接竞争ELISA的条件优化得到如下结论：最佳实验条件为1：1000倍稀释的包被液；1％脱脂奶封闭；1：5000的羊抗兔二抗。在这个实验条件下，间接竞争ELISA检测丁胺卡那霉素，得到回归方程y=0.4641x-0.6958，相关系数R=0.9955(其中y为(B<,0>-B)/B<,0>，x为lg[C])。丁胺卡那霉素浓度在0.05-1.0μg/mL之间，曲线呈良好的线形关系。本方法的最低检测限为40ng/L，IC<,50>=0.38μg/mL。高、中、低三个浓度的批内和批间相对标准偏差分别为19.7％、12.7％、4.5％及20.1％、9.5％和8.0％。另外做了丁胺卡那霉素与同类药物及五类不同种药物的交叉反应，结果表明，均无交叉反应。关于实际样品，检测了牛奶和猪肾中丁胺卡那霉素的残留：间接竞争ELISA检测含丁胺卡那霉素高、中、低三个浓度的牛奶样品的回收率分别为81％、78％和75％，猪肾样品的回收率分别为79％、76％和72％，两者均可满足丁胺卡那霉素的定性定量检测。 4.本试验制备了丁胺卡那霉素单克隆抗体并对其进行了鉴定。通过问接竞争ELISA检测丁胺卡那霉素，得到回归方程；y=0.4942x-0.7554，相关系数R=0.9956(其中y为(B<,0>-B)/B<,0>，x为lg[C])。方法的最低检测限为44ng/mL，IC<,50>=0.35μg/mL；考察了丁胺卡那霉素与同类药物及五类不同种药物的交叉反应，结果表明，均无交叉反应；实际检测了牛奶中丁胺卡那霉素的残留：间接竞争ELISA检测含丁胺卡那霉素高、中、低三个浓度的牛奶样品的回收率分别为84％、79％和72％，回收率比较理想，可满足牛奶样品中丁胺卡那霉素的定性定量检测。

目录

文摘

英文文摘

第1章文献综述

1.前言

1.1动物性食品中兽药的使用及残留现状

1.2畜产品中抗生素残留的产生及影响

1.3兽药残留检测技术

2.四环素类抗生素的特性及残留限量

2.1药理特性与毒副作用

2.2抗菌机制

2.3限量标准与检测

3.丁胺卡那霉素的特性及残留限量

3.1药理特性与毒副作用

3.2抗菌机制

3.3残留限量标准与检测

第2章四环素和丁胺卡那霉素多克隆抗体的制备及性质鉴定

2.1材料

2.2四环素多抗的制备和性质鉴定

2.3丁胺卡那霉素多抗的制备和性质鉴定

2.4结果与分析

2.5小结

第3章丁胺卡那霉素间接竞争ELISA检测的研究

3.1主要试剂与仪器材料

3.2实验方法

3.3结果

3.4讨论

3.5小结

第4章丁胺卡那霉素单克隆抗体的制备及鉴定

4.1试剂和材料

4.2实验方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5小结

第5章结论

参考文献

硕士期间发表及待发表的文章

致谢