PCOS患者中PPAR-γ基因外显子6与INRS基因外显子17多态性的研究

摘要

第一部分PCOS患者中PPAR-γ基因外显子6多态性的研究 背景和目的：多囊卵巢综合征(PolycysticO varyS yndrome，PCOS)是常见的内分泌紊乱性疾病，主要表现为高雄激素血症和不排卵、不孕、肥胖，主要的生化特征为胰岛素抵抗(InsulinR esistancc，I R)、脂代谢紊乱和Ⅱ型型糖尿病。流行病学调查结果显示PCOS呈现出明显的家族聚集性，提示遗传因素在病因学上起着重要的作用。大量研究已证实，遗传因素决定着PCOS的发生。过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(Pcroxisome Proliferator-Activated Receptor-γ，PPAR-γ)是一种转录因子，与脂肪形成、能量代谢有关，是胰岛素激动剂噻唑烷二酮类(TDZs)作用的靶点。有研究发现PPAR-γ基因多态性与肥胖、Ⅱ型糖尿病有关，而肥胖是PCOS的临床表现之一，糖尿病为PCOS的远期并发症之一，本研究的目的是通过对PCOS患者中PPAR-γ基因外显子6多态性的检测，了解PPAR-γ基因外显子6是否存在多态性，并探讨其在多囊卵巢综合征(PCOS)发病中的作用，以期能为PCOS病因探索和治疗提供理论依据。 方法： 选择96名在郑大二附院辅助生殖中心就诊的PCOS患者，56名月经规律，因输卵管梗阻和/或男性不孕的非PCOS患者，后者作为正常对照组。另选在本院内分泌科就诊的Ⅱ型糖尿病患者16例，分别于月经周期第三天采取空腹静脉血、闭经及绝经者可在任意时间采取空腹静脉血，先提取基因组DNA，用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFCP)方法进行目的基因扩增，再用2.5％琼脂糖凝胶电泳确定扩增产物，而后用内切酶PmacⅠ消化PCR产物，以酶切产物判断PPAR-γ基因外显子6的多态性。并分析PPAR-γ基因外显子6多态性与临床指标，包括体重指数(BMI)、空腹血浆葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOME-IR)、促卵泡素(FSH)等之间的关系。 结果： (1)PCOS组PPAR-γ基因外显子6的基因型(CC、CT/TT)频率分别为69％和31％，对照组分别为89％和11％，PCOS组PPAR-γ基因外显子6的CT/TT基因型频率明显高于对照组(P<0.05)； (2)PCOS组的C、T等位基因频率分别为77％、23％，对照组分别为93％、7％，PCOS组的T等位基因频率明显高于对照组(P<0.05)； (3)PCOS患者中PPAR-γ基因外显子6有C→T碱基置换者的BMI(27.60±4.12)明显高于无碱基置换者(24.61+4.51)；有碱基置换者的FINS和HOMA-IR较高于无碱基置换者，但无统计学差异(P>0.05)。 结论： (1)中国汉族妇女确实存在PPAR-γ基因外显子6的多态性； (2)PCOS患者PPAR-γ基因外显子6的碱基置换与PCOS肥胖的发生有关，可能是PCOS的易感基因之一，而不是主要基因。 第二部分PCOS患者中INSR基因外显子17多态性的研究 背景和目的：胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)是多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS)的内分泌代谢特征之一，这与PCOS糖耐量异常和脂肪代谢紊乱有密切关系，而且IR是Ⅱ型糖尿病的主要病理基础。越来越多的学者认为：IR及HI不仅是PCOS的另一重要生化特征，而且可能是PCOS发生的主要病理基础，在PCOS的发病中起着早期和中心的作用。PCOS患者的胰岛素抵抗及高胰岛素血症会加重PCOS患者的雄激素过多、无排卵等生殖功能障碍，以及增加2型搪尿病、高血脂、高血压、动脉粥样硬化、子宫内膜癌等远期并发症发生率。IR的发病机制尚不清楚。 有研究证实，胰岛素受体基因的多态性可以导致受体功能的改变，尤其是酪氨酸激酶片段基因的多态性，可直接影响酪氨酸激酶活性，使胰岛素受体β一亚基的自主磷酸化功能受损，从而导致之后一系列的信号传导异常。尽管近年来对IR发生的机理研究已取得了许多突破性的进展，但由于其涉及面广以及相关的信号转导系统的复杂性，IR的确切分子机理仍不十分清楚。本研究目的是研究胰岛素受体(INSR)基因外显子17多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)的关系，基于己有的研究成果，从基因结构上寻找可能的突变位点；从基因功能调节方面进一步探讨PCOS瓜发生的确切机理，以期为PCOS患者治疗开辟新的途径，为其严重代谢并发症的防治提供理论依据。 方法： 选择96名在郑大二附院辅助生殖中心就诊的PCOS患者，56名月经规律，因输卵管梗阻和/或男性不孕的非PCOS患者，后者作为正常对照组。先提取基因组DNA，用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFCP)方法进行目的基因扩增，再用2.5％琼脂糖凝胶电泳确定扩增产物，而后用内切酶PmlⅠ消化PCR产物，以酶切产物判断INSR基因外显子17-1058位点的的多态性。并检测了PCOS患者有关临床指标，包括体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、睾酮(T)。按INRS基因外显子17第1058位点T、C等位基因出现频率、胰岛素抵抗与否、是否有高雄激素血症分组，分别比较各组间相关指标的差异。 结果： (1)PCOS患者INSR基因外显子17第1058位点T等位基因出现频率为41.7％，明显高于正常妇女的14-3％(P<0.05)； (2)PCOS患者出现T等位基因者的BMI(25.21±4.47)明显低于C等位基因者(26.81±3.20)(P<0.05)； (3)PCOS胰岛素抵抗组与无胰岛素抵抗组的INRS基因出现T、C等位基因频率无统计学差异(P>0.05)； (4)PCOS高雄激素血症组与无高雄激素血症组的INRS基因出现T、C等位基因频率无统计学差异(P>0.05)。 结论： (1)中国汉人INSR基因17外显子C/T单核酸多态性与PCOS患者密切相关。 (2)T等位基因高发频率与PCOS患者的BMI有关，可能是BMI较低的瘦型PCOS的特征之一。 (3)T等位基因高发频率与PCOS患者的高雄激素血症、瓜无密切关系。因此认为INSR基因第17外显子C/T单核酸多态性可能是部分PCOS患者的一个易感基因，而不是关键基因。

目录

文摘

英文文摘

附图

第一部分PCOS患者中PPAR-γ基因外显子6多态性的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分INSR基因外显子17多态性与PCOS的发病关系的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 多囊卵巢综合征与胰岛素抵抗

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