罗格列酮在环孢素肾病中抗纤维化作用及机制

摘要

器官移植对治疗临床终末期疾病取得了很好的疗效,环孢素A(cyclosporineA,CsA)的临床应用显著改善了实体器官移植的近期存活率。尽管新型免疫抑制剂不断涌现,CsA仍然是器官移植后免疫抑制和抗排斥反应的首选药物。但CsA也有很强的副作用,肾毒性是限制其临床应用的主要副作用。既往研究显示,CsA通过对肾脏肾素血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)基因、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)等细胞因子激活以及过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)系统的作用,引起一系列肾脏的毒性作用。最终表现为肾组织中动脉内膜及中膜纤维化、肾小球硬化、肾小管萎缩及肾间质纤维化。慢性CsA肾毒性所致的肾纤维化已成为器官和骨髓移植以及其他免疫性疾病治疗领域亟待解决的问题。罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)属于噻唑烷二酮类(thiazolidinediones,TZDs)胰岛素增敏剂,除具有改善机体胰岛素抵抗等代谢调节作用外,还具有抗炎,影响细胞增殖和转型、抗脏器纤维化等作用,与肾脏疾病有着密切的关系。本实验利用低盐大鼠慢性CsA肾毒性模型,研究CsA慢性肾毒性的发生机制及罗格列酮对CsA慢性肾毒性的保护作用,进一步探讨RGZ在肾脏疾病中发挥的抗炎及抗纤维化的作用。 方法：1.实验分组:健康雄性SD大鼠,将大鼠低盐饮食(钠质量分数0.037％)饲养1w后挑选体质量220~250g的大鼠随机分成:①对照组(n=6),低盐饮食(low salt diet,LSD)②RGZ组(n=6),LSD+RGZ[5mg/(kg·d)];③模型组(n=8),LSD+CsA[15mg/(kg·d)],④治疗组(n=8),LSD+CsA[15 mg/(kg·d)]+RGZ[5 mg/(kg·d)]。于实验2w每组随机收获3只大鼠,5w收获全部大鼠。2.体重和生化指标(Ccr,ALB)检测:收获动物前测体重。检测血清肌酐(serumcreatinine,sCr)、尿肌酐(urine creatinine,uCr)和血清白蛋白(albumin,ALB)。3.肾组织病理改变以HE染色观察单个核细胞浸润数,以Masson染色观察肾间质纤维化比例。4.免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)检测CD68、Ⅳ型胶原(collagenⅣ,CoLⅣ)、的表达。5.反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-9和TIMP-1mRNA表达。
　　结果：1.体重:与对照组相比,模型组大鼠体重显著下降(P<0.05),给予罗格列酮后大鼠体重下降减慢,但在2w和5w与模型组相比,差异均无统计学意义(P>0.05),单用RGZ组与对照组相比,大鼠体重无明显变化。2.生化指标(Ccr、ALB):实验2w,模型组大鼠Ccr和血清ALB显著下降(P<0.05),而治疗组大鼠Ccr和血清ALB下降程度均低于模型组,但两组并无显著性差异(P>0.05),单用RGZ组与对照组相比均无明显差异(P>0.05);实验5w,模型组大鼠Ccr和血清ALB下降更显著(P<0.05),罗格列酮显著改善CsA引起的大鼠Ccr的降低(P<0.05),而治疗组大鼠血清ALB与模型组相比,并无显著性差异(P>0.05),单用RGZ组与对照组相比,大鼠Ccr和血清ALB均无明显差异(P>0.05)。3.单个核细胞浸润:实验2w,与对照组相比,模型组大鼠肾小管间质单个核细胞浸润数(HE染色)明显增加(P<0.05),罗格列酮显著减少CsA引起的大鼠肾小管间质浸润的单个核细胞数(P<0.05),单用RGZ组大鼠肾小管间质单个核细胞浸润不明显。与对照组相比,模型组CD68 IHC染色在实验2w显著增加(P<0.05),罗格列酮显著减少CsA引起的大鼠肾间质CD68的表达(P<0.05),单用RGZ组大鼠肾组织中无CD68表达。实验5w,模型组CD68表达较2w减轻但仍高于对照组(P<0.05),而治疗组CD68表达显著减低(P<0.05),单用RGZ组无CD68表达。4.间质纤维化:实验5w,模型组肾间质纤维化程度(Masson染色)与对照组相比显著增加(P<0.05),而罗格列酮显著减少CsA引起的大鼠肾间质纤维化程度(P<0.05)。单用RGZ组大鼠肾间质无纤维化形成。IHC染色COLⅣ的表达,实验2w,模型组与对照组相比,表达明显升高(P<0.05),与治疗组相比无显著性差异(P>0.05),单用RGZ组与对照组相比无明显差异(P>0.05);实验5w,与对照组相比,模型组COLⅣ表达显著升高(P<0.05),罗格列酮明显减少CsA引起的COLⅣ的表达(P<0.05),单用RGZ组大鼠肾组织无COLⅣ的表达。5.肾组织MMP-9 mRNA表达情况:与对照组相比,模型组及治疗组MMP-9mRNA表达均增加(P<0.05),且2w高于5w。实验2w和5w,治疗组MMP-9mRNA表达均显著低于同时限模型组(P<0.05),单用RGZ组大鼠肾组织MMP-9 mRNA仅有少量表达,与对照组相比无明显差别(P>0.05)。6.肾组织TIMP-1 mRNA表达情况:与对照组相比,模型组及治疗组TIMP-1mRNA表达增加(P<0.05),且5w高于2w。实验2w和5w,治疗组TIMP-1mRNA表达均显著低于同时限模型组(P<0.05),单用RGZ组大鼠肾组织TIMP-1 mRNA仅有少量表达,与对照组相比无明显差别(P>0.05)。
　　结论：1.罗格列酮显著减轻慢性CsA大鼠肾脏早期小管间质单个核细胞浸润及炎症反应,从而延缓继续向间质纤维化发展的进程;2.罗格列酮可能通过调节肾组织MMP-9和TIMP-1 mRNA表达,来抑制CsA所致慢性肾毒性,抑制晚期肾间质纤维化,延缓肾功能恶化。

目录

摘要

Abstract

论文正文 罗格列酮在环孢素肾病中抗纤维化作用及机制

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

附图

参考文献

综述部分 基质金属蛋白酶-9及组织抑制剂-1与环孢素A肾间质纤维化

参考文献

附录部分

中英文对照

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致谢