刺五加注射液、菌栀黄注射液对大鼠肝CYP3A的影响

摘要

中药的进一步发展需要进行中药现代化的研究，其中，中药药动学是一项重要内容。大多数中药的体内过程目前还不清楚，在临床应用上也缺乏科学依据，中西药合用的过程中就很容易产生药物相互作用。在药物相互作用的发生率中，以代谢性相互作用发生率最高。
　　 细胞色素P450酶是体内药物代谢的主要酶类，其中以CYP3A亚型的含量以及代谢的药物最多，为CYP450系统中最重要的一类。CYP450酶的诱导和抑制是发生相互作用的重要因为。目前有关中药对CYP450的影响研究报道较少，且多集中在中药提取物、中药活性成分对CYP的影响，而有关临床上中药的主要应用方式中药复方、中成药对CYP的影响的研究较少，因此，研究中成药、中药复方对CYP450的影响具有很强的实用意义。
　　 本研究的前期结果表明，刺五加注射液和茵栀黄注射液对大鼠肝微粒体CYP3A有较强的抑制作用，因此本研究对二者进行了更深入的研究。
　　 研究目的:
　　 本研究采用体外实验研究刺五加注射液和茵栀黄注射液中主要活性成分对CYP3A的抑制作用，从而阐明二者对CYP3A的抑制作用，并采用体内试验的方法研究刺五加注射液和茵栀黄注射液对CYP3A的特异性底物咪达唑仑的药动学的影响，评价二者对CYP3A的体内影响作用，指导其临床用药。
　　 研究方法:
　　 1.刺五加注射液对CYP3A的影响
　　 1.1刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、异秦皮啶的含量测定HPLC法测定刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、异秦皮啶的含量。
　　 1.2刺五加注射液及其组分刺五加苷B、刺五加苷E、异秦皮啶对CYP3A的体外抑制作用
　　 1.2.1大鼠肝微粒体的制备取肝脏采用钙沉淀法制备大鼠肝微粒体。
　　 1.2.2微粒体蛋白的含量测定Bradfrod法测定微粒体蛋白含量。
　　 1.2.3孵育反应孵育体系总体积500μL，反应体系中包含NADPH，磷酸盐缓冲液，EDTA，MgCl2和微粒体蛋白。反应在37℃水浴中进行，预孵育5min，加入NADPH启动反应。实验分为对照组和实验组进行，实验组加入各成分，对照组加入等体积磷酸盐缓冲液。
　　 1.2.4酶活性的测定HPLC法测定咪达唑仑的转化程度。
　　 1.3刺五加注射液对大鼠体内咪达唑仑药动学的影响大鼠随机分为实验组和对照组，实验组每日静脉注射刺五加注射液(40ml·kg-1)，对照组每日静脉注射相同剂量的生理盐水，连续给药7d，末次给药2h后，尾静脉注射咪达唑仑注射液10mg·kg-1，分别于给药后2，5，8，11，15，25，35，45，60，90min采血0.5ml，肝素抗凝，离心分离血浆，HPLC法测定血浆中咪达唑仑的浓度。
　　 2.茵栀黄注射液对CYP3A的影响
　　 2.1茵栀黄注射液及其组分黄芩苷、栀子苷对大鼠CYP3A的体外抑制作用
　　 2.1.1大鼠肝微粒体的制备采用钙沉淀法制备大鼠肝微粒体。
　　 2.1.2微粒体蛋白的含量测定Bradfrod法测定微粒体蛋白含量。
　　 2.1.3孵育反应孵育体系总体积500μL，反应体系中包含NADPH，磷酸盐缓冲液，EDTA，MgCl2和微粒体蛋白。反应在37℃水浴中进行，预孵育5min，加入NADPH启动反应。实验分为对照组和实验组进行，实验组加入各成分，对照组加入等体积磷酸盐缓冲液。
　　 2.1.4酶活性的测定HPLC法测定咪达唑仑的转化程度。
　　 2.2茵栀黄注射液连续给药对大鼠CYP3A的抑制作用大鼠随机分为实验组和对照组，实验组每日静脉注射茵栀黄注射液(40mg·kg-1)，对照组每日静脉注射相同剂量的葡萄糖注射液，连续给药7d，末次给药后即刻处死大鼠取肝脏制备肝微粒体，体外测定实验组和对照组大鼠咪达唑仑的转化程度。
　　 2.3茵栀黄注射液对大鼠体内咪达唑仑药动学的影响
　　 实验采用自身对照，12只雄性SD大鼠连续尾静脉注射10％葡萄糖注射液3d后，于末次给药后即刻，单次快速静脉注射咪达唑仑注射液10mg·kg-1，并于2，7，15，30，50，70，100min采血0.5ml，离心分离血浆。
　　 首次采血3d后，12只大鼠尾静脉注射茵栀黄注射液(40mg·kg-1)，连续给药7d，末次给药后静脉注射咪达唑仑注射液10mg·kg-1，分别在给药后上述时间点采血0.5ml，离心分离血浆。
　　 HPLC法测定大鼠单用咪达唑仑注射液组与合用茵栀黄注射液组咪达唑仑的血药浓度。
　　 3.统计分析采用3P97药动学软件，计算咪达唑仑药动学参数。应用SPSS10.0软件进行数据分析，实验组和对照组之间的比较采用独立样本t检验，咪达唑仑单用组及与茵栀黄注射液合用组咪达唑仑血药浓度及药动学参数比较采用配对t检验，P<0.05认为有统计学意义。
　　 结果：
　　 1.刺五加注射液对CYP3A的影响
　　 1.1刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、异秦皮啶的含量测定
　　 两批次刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E和异秦皮啶的含量分别为：0.192、0.108、0.0165mg·ml-1(080915);0.228、0.138、0.0266mg·ml-1(081011)。
　　 1.2体外实验研究刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、异秦皮啶对CYP3A的抑制作用刺五加注射液对CYP3A有抑制作用(P<0.001)，抑制率为33.78±1.57％；刺五加苷B(P=0.159)、刺五加苷E(P=0.290)、异秦皮啶(P=-0.317)和三成分合用组(P=0.134)对大鼠CYP3A无显著抑制作用。
　　 1.3刺五加注射液对咪达唑仑的药动学的影响咪达唑仑静脉注射后，在大鼠体内的药代动力学符合二室模型。实验组和对照组咪达唑仑血药浓度和药动学参数均无显著性差异。
　　 2.茵栀黄注射液对CYP3A的影响
　　 2.1茵栀黄注射液及其组分黄芩苷、栀子苷对大鼠CYP3A的体外抑制作用茵栀黄注射液(P=0.002)、黄芩苷(P=0.01)、黄芩苷和栀子苷合用组(P=0.001)对CYP3A有抑制作用，抑制率分别为(48.49±4.51)％、(57.41±10.08)％、(43.68±7.50)％；栀子苷(P=0.259)对CYP3A无显著抑制作用。
　　 2.2茵栀黄注射液连续给药对大鼠CYP3A的抑制作用连续静脉注射茵栀黄注射液7d后，实验组大鼠CYP3A酶活性显著低于对照组(P=0.002)，探针药物咪达唑仑的代谢减少了约(39.64±15.87)％。
　　 2.3茵栀黄注射液对大鼠体内咪达唑仑药动学的影响合用茵栀黄注射液后，咪达唑仑的血药浓度较单用组有显著提高，单用组与合用组咪达唑仑的主要药动学参数AUC0→t值分别为160.28±44.45、357.46±153.02(μg·ml-1)·min，合用组较单用组有显著提高(P<0.001)；CL值分别为0.059±0.016、0.028±0.012 mg·kg-1·min-1，合用组较单用组有显著下降(P<0.001)；T1/2β分别为39.58±8.63、38.96±12.14 min，二者相比没有显著变化(P=0.894)。
　　 结论：
　　 1.刺五加注射液可明显抑制大鼠离体肝微粒体CYP3A活性，其抑制作用与刺五加苷B、刺五加苷E和异秦皮啶无关。
　　 2.刺五加注射液对CYP3A探针药物咪达唑仑在大鼠体内的药动学无明显影响。
　　 3.茵栀黄注射液对大鼠离体肝CYP3A有明显抑制作用，其作用与黄芩苷有关。
　　 4.茵栀黄注射液多次给药对大鼠肝CYP3A有明显抑制作用。
　　 5.茵栀黄注射液显著抑制CYP3A探针药物咪达唑仑在大鼠体内的药动学。

目录

文摘

英文文摘

符号说明

前言

第一部分 刺五加注射液对大鼠肝CYP3A的影响

前言

实验材料

实验方法

结果

讨论

结论

第二部分 茵栀黄注射液对大鼠肝CYP3A的影响

前言

实验材料

实验方法

结果

讨论

结论

全文小结

参考文献

综述中药对细胞色素P4503A影响的研究进展

参考文献

个人简历

致谢