米诺环素对大鼠肢体缺血在灌注继发肺损伤的影响

摘要

肢体缺血再灌注所继发肺损伤的表现是急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)和成人呼吸窘迫症(Adult respiratory distress syndrome，ARDS)，在急救医学中是发病率和死亡率都很高的一种并发症。ALI是ARDS病程早期阶段，指机体遭受严重感染、创伤、休克等打击后，出现以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤导致肺水肿和肺不张等病理特征，临床上的表现是呼吸窘迫，伴有顽固性低氧血症、肺顺应性下降和扩散性炎症浸润，进行性加重表现为ARDS，其病死率高达45％-50％。因此积极防治本类疾病在急危重领域具有非常重要的意义。
　　 目的
　　 本实验利用大鼠下肢缺血/再灌注产生大量炎性介质导致远隔器官肺损伤模型，观察治疗剂量的盐酸米诺环素，对缺血再灌注所引起的肺组织中自介素-6的变化，肺组织基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9，和肺的干湿比变化，结合组织病理改变，进一步探讨盐酸米诺环素对肢体缺血/再灌注后远隔器官肺损伤的保护作用及其机制，为盐酸米诺环素在肺脏保护方面的临床应用提供实验支持。
　　 材料与方法
　　 30只SD成年雄性大鼠(郑州大学实验动物中心提供，体重230g±30)随机分为三组，模型组(M组，n=10)、生理盐水组(NS组，n=10)和米诺环素干预组(C组，n=10)。实验大鼠不限制活动，自由进食，进水。三组大鼠乙醚吸入麻醉后，生理盐水组待自然清醒；大白鼠NS组，M组，经大鼠尾静脉注入生理盐水1.0ml；C组，米诺环素按公斤体重10mg，(约1.0ml)由大鼠尾静脉注射入体内；M组和C组分别结扎大鼠双下肢，以结扎后双下肢变白为缺血成功标志；3h后M组C组大鼠双下肢结扎线去除，按摩大鼠双下肢以皮肤色泽转为红润为肢体再灌注成功标志。再灌注成功4h后三组均使用5％水合氯醛腹腔注射麻醉后，依次剪开胸腔，胸骨，暴露肺脏，迅速结扎右肺门，切除右肺，取右肺上叶测量干湿比，中叶置于-80℃冰箱中待用，右肺下叶置电镜保护液中行透射电镜观察。经右心耳进行生理盐水灌洗，左肺经生理盐水灌洗变白后用甲醛适量灌洗，切去左肺下叶置于甲醛中浸泡，制备蜡块，切片，HE染色观察，免疫组化观察基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的在肺组织的着色及灰度对比。
　　 结果：
　　 1.肺组织含水量的改变：M组肺组织含水率明显高于NS组(P<0.01)，C组肺组织含水率高于NS组低于M组(P<0.01)。
　　 2.组织病理变化：肺组织光镜观察，NS组肺泡结构正常；M组肺间隔增宽，间质中有大量中性粒细胞浸润，局部肺泡出现不张、水肿，肺泡腔内有大量红细胞；C组肺间隔仅轻度增宽，少量中性粒细胞浸润无肺不张或肺出血。电镜观察，NS组肺毛细血管基底膜较完整，肺泡Ⅱ型上皮细胞呈椭圆型或圆形，游离面微绒毛及板层体较完整，胞浆丰富。M组见到肺毛细血管基底膜连续性中断，内皮细胞间隙增宽，毛细血管内皮细胞肿胀，肺泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛破坏程度严重，微绒毛可见变短、减少甚至消失，Ⅱ型上皮细胞板层体排空。C组游离面微绒毛破坏轻，损伤程度介于NS组与M组。
　　 3.免疫组化SP法，肺组织中MMP-2，MMP-9的表达：免疫组化切片以平均光度、平均灰度、阳性面积、阳性单位为指标进行半定量分析。NS组平均光密度值，与M组平均光密度值相比(P<0.01)，差异有统计学意义。M组平均光密度值>C组平均光密度值>NS组平均光密度值(P<0.01)，差异有统计学意义。
　　 4.IL-6：NS组肺组织匀浆中IL-6含量极少，M组含量最高，C组含量介于M组与NS组之间。M组与C组相比(P<0.01)，差异有统计学意义；C组与NS组相比(P<0.01)，差异有统计学意义。
　　 结论：
　　 1.结扎大鼠双下肢所引起的肢体缺血再灌注可以导致大鼠急性肺损伤。
　　 2.肢体缺血再灌注所致肺损伤可引起肺组织IL-6，MMP-2和MMP-9的升高。
　　 3.盐酸米诺环素对大鼠下肢肢体缺血再灌注所造成的远隔脏器肺损伤有一定的保护作用，其机制可能与米诺坏素抑制炎症反应有关。

目录

文摘

英文文摘

1 引言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 方法

2.3 统计方法

3 结果

3.1 一般资料比较

3.2 肺组织匀浆IL-6含量

3.3 肺组织干湿比

3.4 肺组织病理学观察

3.5 肺组织MMP-2和MMP-9表达

4 讨论

4.1 模型制备

4.2 IL-6,MMP-2和MMP-9肺组织表达

4.3 盐酸米诺环素与肢体缺血-再灌注肺损伤

5 结论

参考文献

综述部分

参考文献

中英文缩略词表对照表

致谢

个人简历及在学期间发表的学术论文