N-乙酰半胱氨酸对大鼠亚硒酸钠性白内障防治作用的实验研究

摘要

研究目的
　　 观察N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)对亚硒酸钠诱导的大鼠白内障的预防和治疗作用，为白内障的药物防治提供实验依据。
　　 对象与方法
　　 (一)预防作用实验
　　 10天龄SD大鼠30只随机分3组：
　　 正常对照组-1(A1组)：每日腹腔注射0.1ml/10g体重剂量的生理盐水，1次/日，共注射6天。
　　 亚硒酸钠组(B1组)：按3.46mg/kg(即20μmol/kg体重)颈部皮下注射亚硒酸钠，隔日一次，共注射3次。注射亚硒酸钠30分钟内，按0.1ml/10g体重腹腔注射生理盐水，共注射6天。
　　 NAC预防组(C1组)：给10天龄SD大鼠按3.46mg/kg(即20μmol/kg体重)颈部皮下注射亚硒酸钠，隔日一次，共注射3次。注射亚硒酸钠30分钟内，按0.1ml/10g体重的剂量腹腔注射浓度为2mmol/L的试剂NAC，1次/日。共注射6天。
　　 (二)治疗作用实验
　　 白内障模型制备：10天龄SD大鼠30只，按3.46mg/kg(即20μmol/kg体重)颈部皮下注射亚硒酸钠，隔日一次，共注射3次。将造模成功的大鼠随机分为病理对照组(15只)和NAC治疗组(15只)。
　　 病理对照组(B2组)：每日腹腔注射0.1ml/10g体重的生理盐水，共注射1月。
　　 NAC治疗组(C2组)：按0.1ml/10g体重的剂量腹腔注射浓度为2mmol/L的试剂NAC，1次/日。共注射1月。
　　 正常对照组-2(A2组)：选预防实验中5只正常对照组大鼠，继续按0.1ml/10g体重的剂量腹腔注射生理盐水，1次/日。共注射30天。
　　 大鼠睁眼后裂隙灯下定期观察大鼠晶状体的浑浊情况并拍照；最后一次注药后，分批处死大鼠，取出眼球，分离晶状体。光镜和扫描电镜下观察晶状体上皮组织学和超微结构的改变；免疫组化观察亚硒酸钠对晶状体上皮细胞中caspase-3的影响。生化方法测定亚硒酸钠对大鼠晶状体组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。
　　 结果：
　　 小剂量隔日颈部皮下注射20μmol/kg亚硒酸钠溶液均可安全地诱导出大鼠白内障动物模型。
　　 1.裂隙灯观察：亚硒酸钠组和病理对照组大鼠晶状体混浊情况持续性加重，在注药后第3天大部分晶状体核出现环状或尘埃状混浊，七天均形成典型的核性白内障，正常对照组晶状体均保持透明，未见混浊；预防组晶状体混浊程度低于亚硒酸钠组，而高于正常对照组；治疗组大鼠晶状体混浊程度与相应的病理对照组无明显差异。
　　 2.光镜和扫描电镜观察：正常对照组晶状体组织结构基本正常，其他各组晶状体超微组织结构有不同程度的改变。其中预防实验中，亚硒酸钠组损伤最重，NAC预防组次之，正常对照组最轻，三组差别显著。治疗试验中，病理对照组和NAC治疗组无明显差异。
　　 3.免疫组化观察：晶状体上皮细胞caspase-3在正常对照组呈阴性表达，平均光密度为250.319±2.347；NAC预防组呈弱阳性表达，平均光密度值为180.942±4.379，在亚硒酸钠组呈强阳性表达，平均光密度值为70.312±14.216，三组比较差异均有有显著性意义(P<0.05)；在NAC治疗组和病理对照组均呈强阳性表达，平均光密度值分别为100.467±4.477，71.437±11.329，
　　 两组比较，差异无统计学意义(p>0.05)，但两组分别与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　 4.生化指标分析：NAC预防组晶状体中的SOD的活性高于亚硒酸钠组(P<0.05)，而低于正常对照组(P<0.05)；NAC治疗组晶状体中的SOD的活性明显低于正常对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)，而与相应的病理对照组比较无明显差异(P>0.05)。NAC预防组晶状体中的MDA含量低于亚硒酸钠组(P<0.05)，而高于正常对照组(P<0.05)。NAC治疗组晶状体中的MDA含量与相应的病理对照组比较无明显差异(P>0.05)。
　　 结论：
　　 1.对SD大鼠皮下小剂量多次注射亚硒酸钠可成功制备硒性白内障模型。
　　 2.亚硒酸钠可引起LECs凋亡。
　　 3.NAC可以通过提高晶状体组织中 SOD的活性，减少MDA生成，降低caspase-3的活性来减轻亚硒酸钠引起的晶状体损伤。
　　 4.NAC对早期白内障的发生、发展有一定的延缓和预防作用。
　　 5.试剂NAC对于已经形成的硒性白内障无明显的治疗作用。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

引言

1.材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法及步骤

1.3 检测指标及方法

1.4 统计学分析

2.结 果

2.1 裂隙灯观察

2.2 H E染色组织病理学观察

2.3 扫描电镜观察

2.4 免疫组化观察

2.5 晶状体组织中SOD活性和(MDA)含量测定

3.讨 论

3.1 大鼠亚硒酸钠性白内障模型的建立

3.2 氧化损伤与白内障

3.3 晶状体上皮细胞凋亡与白内障

3.4 NAC对亚硒酸钠诱导的白内障的防治效果及机制

4.结 论

5.附 图

6.参考文献

综述部分

1.发病机制

2.药物研究与现状

3 小结与展望

参考文献

个人简历及在学期间发表的学术论文

致谢