通过干扰核盘菌重要功能基因提高油菜对菌核病的抗性

摘要

核盘菌引起的油菜菌核病是我国油菜的一种重要病害,尤其在南方油菜产区发病严重,直接影响到油菜的高产优质,造成巨大经济损失,居中国油菜三大病害之首。
　　 cAMP-dependent protein kinase A gene、exopolygalacturonase gene、chitin synthasegene、endopolygalacturonase-pg5 gene、DNA-dependent RNA polymerase Ⅱ gene是核盘菌致病力发挥作用的关键酶。这五种关键酶的基因构建的hpRNAi载体,其中endopolygalaeturonase-pg5 gene、exopolygalacturonase gene的hpRNAi载体是采用一个短的片段和一个长的反向片段连接而成,其余3个基因的hpRNA干扰载体是将正向片段和反向片段连接到PG-intron的两端。
　　 本文对油菜的培养基进行了优化,获得最佳分化频率的激素比2.0mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、4.0mg/LAgNO3、6.0mg/LZT、2.0mg/LTDZ,并确定Kan的筛选压8mg/L以及共培养时间60～72h。通过农杆菌介导的转化,分别将目的RNM结构单元导入甘蓝型油菜,通过卡那霉素筛选得到抗性植株,然后对其进行分子鉴定和叶片抗病接种鉴定,得到的大部分的转基因植株叶片病斑的发生时间比负对照要晚24h-48h,病斑也明显小于负对照。