甘蓝型油菜小孢子培养及倍性鉴定

摘要

近年来，随着生物技术的不断发展与完善，游离小孢子培养技术在育种上的应用日渐广泛，大大加快了油菜的育种进程。本研究以大田栽培环境下的甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系为材料，进行了油菜游离小孢子培养，同时对小孢子胚状体发生条件、小孢子植株倍性鉴定的不同方法进行了研究。结果如下：
　　 1.油菜小孢子取材时间对小孢子胚胎发生影响较大。以始花期产胚数最高，培养效果最好，为最佳取蕾时期，盛花期次之。
　　 2.花序长度对油菜小孢子胚胎发生具有显著影响。通过细胞学观察表明，当花蕾长度为2.5-3.5mm时，75％以上的小孢子发育处于单核晚期，所获得的胚状体较多。
　　 3.在游离小孢子培养的培养基选择上，研究发现以NLN液体培养基进行游离小孢子培养较好，细胞分裂素0.1mg/16-BA的应用，可促进小孢子胚胎发生率。活性炭对胚胎发生没有显著影响，但改善了小孢子的生存环境。
　　 4.低温预处理影响小孢子的产胚率。4℃低温预处理6h，促使小孢子的胚胎发生能力增强，随着花序低温处理时间的延长，小孢子的产胚率有下降趋势。
　　 5.应用形态学和解剖学特征对小孢子培养植株的倍性进行快速初步鉴定，发现染色体鉴定结果为，单倍体植株n=19，正常二倍体2n=38:首次使用流式细胞仪对油菜小孢子植株及加倍植株倍性进行鉴定，结果表明流式细胞仪鉴定结果与形态观察、染色体计数结果一致，是一种快速、简便、准确的检测植物倍性的方法，为早期鉴定油菜小孢子植株倍性以用于遗传育种提供了参考依据。

目录

文摘

英文文摘

1 文献综述

1.1 选题背景

1.2 研究目的与研究意义

1.3 问题的提出

1.3.1 油菜的单倍体育种

1.3.2 单倍体的获得方法

1.3.3 单倍体育种优势

1.3.4 国内外单倍体育种研究

1.3.5 甘蓝型油菜游离小孢子培养研究进展

1.3.6 小孢子加倍方法

1.3.7 小孢子倍性检测

1.3.8 研究范围与方法

2 实验部分

2.1 实验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 实验设备

2.1.3 实验试剂

2.2 实验方法

2.2.1 小孢子分离和培养

2.2.2 染色体加倍

2.3 各因素对小孢子培养的影响试验

2.3.1 花蕾的采集时期实验

2.3.2 花营长度选择标准实验

2.3.3 低温预处理试验

2.3.4 培养基试验

2.4 染色体倍性实验

2.4.1 染色体制片法

2.4.2 气孔大小观察

2.4.3 植株形态观察

2.4.4 流式细胞仪检测染色体倍性

3 结果与分析

3.1 花蕾选取时期对小孢子胚产量的影响

3.2 花蕾的选择标准与小孢子胚状体的发生

3.3 低温预处理与小孢子出胚率的影响

3.4 培养基成分与小孢子出胚率的影响

3.5 染色体倍性鉴定

3.5.1 染色体制片法

3.5.2 气孔大小观察

3.5.3 植株形态观察

3.5.4 流式细胞仪检测染色体倍性

4 讨论

4.1 取样时期与小孢子胚状体发育的关系

4.2 花蕾大小与小孢子胚状体的形成

4.3 低温预处理与小孢子胚状体的形成

4.4 培养基类型与小孢子胚状体的形成

4.5 激素与小孢子胚状体的形成

4.6 活性炭与小孢子胚状体的形成

4.7 倍性检测

4.7.1 染色体制片法

4.7.2 气孔大小观察

4.7.3 植株形态观察

4.7.4 流式细胞仪倍性检测

5 结论

参考文献

附录A

附录B

缩写词与英汉名词对照

个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢