栽培花生基因组BAC文库的构建

摘要

栽培花生(Arachis hypogaea L.)是异源四倍体,含有A和B两个基因组。现有研究认为四倍体栽培种是由二倍体种A.duranensis(A genome)和A.ipa(e)nsis(Bgenome)单一杂交后经染色体自发加倍而成。单一杂交起源、多倍化引起的生殖隔离和少数育种亲本的使用,使栽培花生基因组高度保守,遗传多样性非常有限,因此,利用遗传作图的方法分析基因十分困难。花生基因组BAC文库的构建,对利用物理图谱的方法来分析花生基因组有很大的价值,可从该文库中调取大量有用的基因,在利用基因工程技术改良作物品种性状、开展分子育种等方面发挥重要作用。
　　 本实验以栽培花生中花8号植株叶片为材料,参照已报道的BAC文库构建方法,在此基础上进行技术改进,建立了一套适用于栽培花生品种的BAC文库构建技术体系。选取幼嫩的植物叶片,得到了浓度适宜,分子量大于1Mb的高分子量DNA琼脂糖包埋块儿,选择合适的酶切条件回收到符合分子量要求的DNA大片段,通过建立高效的连接体系,到目前为止共得到25,344个重组克隆。随机挑取80个克隆经小量碱裂解法提取质粒酶切鉴定,脉冲凝胶电泳结果显示,插入片段大小在30kb-150kb之间,平均插入片段大小为80kb,空载率为1.25％。随机挑取3个BAC克隆做稳定性继代实验,连续培养100代之后,BAC克隆依然稳定,没有重排现象。
　　 本实验构建的BAC文库是我国迄今构建的第一个栽培花生BAC文库,尽管文库覆盖率到目前为止还不能满足作图和测序的需要,但是建立了一个完整高效的适用于栽培花生基因组的BAC文库构建技术体系。