重组人促红细胞生成素(rhEPO)对帕金森病大鼠模型小胶质细胞活化及炎症因子表达的影响

摘要

帕金森病(Parkinson's disease，PD)是以运动障碍为主要临床特征的进展性神经系统变性病，其病理改变以黑质多巴胺(dopamine，DA)能神经元变性丢失为主。目前主要的治疗方法为DA替代治疗。虽然DA替代治疗能够改善症状，但长期应用则会出现很多并发症和副作用，而且这些并发症以目前的治疗措施很难控制。并且在众多抗PD药物中没有任何一种能够阻止或逆转疾病的进展，因此神经保护治疗开始成为人们研究的热点。其中，促红细胞生成素(eryhropoietin，EPO)作为造血因子，一般在胎儿肝脏和成人肾脏中产生，并在组织缺氧情况下刺激骨髓红细胞造血。EPO一直被用于治疗慢性肾衰或癌症化疗引起的贫血。最近，研究发现EPO在很多中枢神经系统(CNS)疾病中发挥着神经保护作用，如EPO可以减轻脑外伤、脑缺血、癫痫持续状态等诱发的神经细胞损伤，而且在Alzheimer病、肌萎缩侧索硬化、Huntington病、Parkinson's病等神经变性病中也具有保护作用。随着年龄的增长，EPO在CNS的含量逐渐减少，提示EPO可能和衰老有关的神经变性病有关。实验研究证实EPO对多种神经元均有保护作用，其中包括黑质DA能神经元，但是作用机制还不十分清楚。以往人们认为，EPO主要是通过抗氧化应激、抑制凋亡、抑制谷氨酸盐释放来保护DA能神经元。最近有人提出EPO的保护作用是通过抑制炎症因子产生，发挥抗炎作用实现的，但这一结论引起了争议。
　　 本实验在6-OHDA诱导的PD大鼠模型中，观察rhEPO对小胶质细胞及胶质细胞源性炎症因子表达的影响，探讨rhEPO是否通过抑制炎症反应发挥神经保护作用。
　　 目的：探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin，rhEPO)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SD大鼠帕金森病(PD)模型小胶质细胞活化及胶质细胞源性炎症因子表达的影响。
　　 方法：SD大鼠随机分为四组：A组(rhEPO+6-OHDA)、B组(生理盐水+6-OHDA)、C组(6-OHDA)、D组(生理盐水)。(1)A组：右侧纹状体内立体定向注射rhEPO24小时后同侧黑质内立体定向注射6-OHDA；(2)B组：右侧纹状体内立体定向注射与rhEPO等量的生理盐水24小时后同侧黑质内立体定向注射6-OHDA；(3)C组：右侧黑质内立体定向注射6-OHDA；(4)D组：右侧黑质内立体定向注射与6-OHDA等量的生理盐水。4周后从A、B、C组各选取10只成功PD大鼠，从D组随机选取10只大鼠进行指标检测：免疫组化法检测黑质内酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量和CD11b阳性细胞数量的变化；酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化；反转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测黑质内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达。
　　 结果：与D组比较，A组大鼠黑质TH阳性神经元显著减少(P<0.05)，CD11b阳性细胞显著增多(P<0.05)，血清iNOS、TNF-α含量显著增多(P<0.05)，黑质iNOS、TNF-αmRNA表达显著增高(P<0.05)；与B组和C组比较，A组大鼠黑质TH阳性神经元明显增多(P<0.05)，CD11b阳性细胞明显减少(P<0.05)，血清iNOS、TNF-α含量明显减少(P<0.05)，黑质iNOS、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.05)。
　　 结论：rhEPO可能通过抑制小胶质细胞活化，减少TNF-α、iNOS炎症因子的表达，从而减轻6-OHDA对黑质DA能神经元的毒性损害，保护DA能神经元。