粉尘螨和热带无爪螨生殖系统形态学研究及变应原定位

摘要

目的：揭示居家过敏性尘螨中的粉尘螨（Dermatophagoides farinae）和热带无爪螨（Blomia tropicalis）雌雄生殖系统的显微和超微形态结构，尝试建立热带无爪螨雌雄生殖系统的可视化立体构型，同时探索一种热带无爪螨显微结构计算机三维重建的实用方法；通过免疫组化技术对热带无爪螨的变应原定位进行初步探讨，为居家过敏性尘螨变应原的防治奠定基础。
　　方法：1）雌雄粉尘螨和热带无爪螨经1.5％琼脂预包埋后，用LEICA切片机分别制作5μm的石蜡连续横切片，光学显微镜观察其生殖系统的内部显微形态；2）将螨按照所需位置摆放于双面导电胶上，置导电杯中，放入JEOL JSM-6490扫描电镜内抽真空，观察外生殖器官的超微结构；3）连续石蜡横切片，HE染色，获得生殖系统二维图片，经Photoshop综合处理图片后，用Image-Pro Plus（IPP）软件对生殖系统各部分进行配准和三维重建，实现生殖系统的三维可视化；4）选用尘螨过敏患者的阳性血清作探针，免疫组织化学染色分析变应原存在部位。
　　结果与结论：1）通过对粉尘螨和热带无爪螨雌雄生殖系统的对比研究显示，雄性生殖系统均分别由睾丸、输精管、附属腺、射精管、阳茎几部分组成，但两者之间个别器官的结构和形态有很大差异，粉尘螨的睾丸和附属腺仅有一个，而热带无爪螨有睾丸一对，呈对称分布，附属腺为两个，巨大，形态和染色性差别较大；雌性生殖系统组成均包括：交配孔（管）、储精囊、囊导管、卵巢、输卵管、子宫、产卵管及产卵孔组成，卵巢由一个中央营养细胞和围绕其周围的卵母细胞组成。雌雄生殖系统结构和组成与无气亚门目螨类基本相似。2）通过对热带无爪螨雌雄生殖系统二维连续图片的处理和配准，雌雄生殖系统的三维模型被重建实现。可以人机交互的任意三维旋转、任意断面切割。可在同一三维空间同时显示各生殖器官的立体结构，反映其在空间位置上的结构、毗邻关系和走行。重建得到的生殖系统模型轮廓清晰，能真实反映热带无爪螨生殖系统原有的空间结构。3）此外，由于热带无爪螨的变应原定位在国内外还少见报道，本文利用免疫组化的方法对热带无爪螨体内的变应原分布进行了定位研究，经免疫组织化学染色可见热带无爪螨中肠、盲囊、结肠的肠壁和内容物及生殖腺等均有阳性反应。其中肠壁组织和肠腔内容物呈强阳性反应，提示为变应原的主要存在部位。

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前言

1 材 料 与 方 法

1.1实验材料

1.2 主要试剂

1. 3 主要仪器和设备

1.4方法

2 结 果

2.1粉尘螨生殖系统形态学研究

2.2热带无爪螨生殖系统形态学研究

2.3 生殖系统三维重建

2.4热带无爪螨变应原定位免疫组化分析

3 讨 论

3.1 生殖系统形态学结构比较

3.2 三维重建技术

3.3变应原定位

4．结 论

参考文献

致谢

附录 A中英文术语对照

附录B常 用 试 剂 配 制

附录 C个人简历及发表论文目录

附录D 综述: 热带无爪螨与相关的变应原