人工干预对着床失败患者种植窗口期子宫内膜LPAR3和HOXA11表达影响的研究

摘要

不孕症发病率逐年上升，平均发生率10％左右，成为影响家庭和睦的重要因素，而体外受精—胚胎移植（Invitrofertilization-embryotransfer，IVF—ET）等助孕技术使不孕症的治疗出现革命性的提升。正常妊娠需要历经排卵、受精、卵裂、植入四个环节，每一环节异常均可导致胚胎种植失败，其中胚胎质量和子宫内膜环境是影响胚胎种植和临床妊娠率的最主要因素。控制性超促排卵、胚胎实验室技术的改进，使得胚胎数量、质量得以优化，加之胚胎移植技术的不断提高，但IVF—ET的周期妊娠率依然徘徊在40％，其主要原因可能就与子宫内膜胚胎移植环境有关。子宫内膜环境主要指的是子宫内膜容受性。人类能接受胚胎种植的内膜环境只存在于某一特定时期，即着床窗口期（排卵后5-7d）。本课题在前期实验的基础上选择溶血磷脂酸受体3(Lysophosphatidicacidreceptor3，LPAR3)和同源框基因11(Homeoboxgene11，HOXA11)两个指标，探讨对移植失败患者再次移植前实施干预性治疗后两个因子在子宫内膜的表达变化及其对着床窗期子宫内膜容受性的影响。国内外大量学者试图用多种方法提高子宫内膜的容受性，其中包括中西医药物和手术治疗。本课题选择子宫内膜搔刮术和中成药（调经促孕丸）对前次移植未孕的患者进行干预性治疗。
　　 目的：
　　 按是否进行干预将前次移植失败病历分组研究比较LPAR3和HOXA11在子宫内膜着床窗口期的基因和蛋白表达，从而探讨改善子宫内膜容受性的方法，并寻求相对适宜的方法以提高辅助生殖技术的临床妊娠率。
　　 方法：
　　 将前期在郑州大学第三附属医院生殖中心移植未孕的患者69例患者随机分成三组，包括子宫内膜搔刮术20例（实验1组）和口服中成药（调经促孕丸）21例（实验2组），未行干预措施的28例（对照组）。
　　 干预措施:①子宫内膜搔刮术在移植前2个月经周期月经来潮24h内进行子宫内膜搔刮术，患者排尿后取膀胱截石位，查明子宫的大小和位置;常规消毒铺洞巾，阴道窥器暴露宫颈，碘伏消毒宫颈及宫颈外口，用宫颈钳夹持宫颈9点到11点位置，探针测量宫腔深度，然后将小刮匙送到宫底部，轻柔表浅并均匀地搔刮子宫腔内膜各面。②中成药（调经促孕丸）患者口服调经促孕丸，一次5g，一日2次，月经周期规律者于周期第五天起连服20天;周期不规律者配合激素替代治疗每月应用20天，连服2个疗程，第3个月经周期初期运用促排卵药诱导排卵，于排卵后7天进行预移植，同时获取着床窗期子宫内膜。
　　 标本获取:①内膜的获取:于排卵后第5-7天进行预移植（一般在再次移植前的一个周期），用一次性子宫内膜取样器探明宫腔深度并获取少量内膜组织，然后将内膜组织分二份直接投入3ml的一次性无菌试管冻存于液氮中，等待半定量RT-PCR和WesternBlot检测着床窗口期子宫内膜LPAR3和HOXA11的基因和蛋白的表达。②血清性激素的测定:刮取子宫内膜当天抽取受检者清晨空腹外周静脉血3ml测血清雌、孕激素。
　　 实验数据以(x)±s形式来表示。定量资料符合正态分布和方差齐性的采用单因素方差分析，定性资料采用卡方检验。应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。以P＜0.05有统计学差异。
　　 结果：
　　 1、实验组与对照组临床资料的比较
　　 三组临床资料对比，平均年龄、体重指数(Bodymassindex，BMI)、不孕年限和类型、促排卵药物(Gn)使用天数和剂量、获卵数、基础状态（月经来潮2～4天）血清性激素(FSH、LH、E2)、着床窗期血激素（E2、p值）、移植胚胎数均无统计学差异(P＞0.05)，两实验组临床妊娠率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），但是两组实验组组间无统计学意义（P＞0.05）。
　　 2、RT-PCR产物定性与半定量结果
　　 实验组LPAR3和HOXA11mRNA在着床窗期子宫内膜的表达增强，灰度值比高于对照组（LPAR3的mRNA表达量分别为:0.326±0.042，0.685±0.103，0.701±0.116，P＜0.05;HOXA11的mRNA表达量分别为:0.142±0.022，0.354±0.046，0.372±0.053，P＜0.05)，差异有统计学意义，但是两组实验组组间的表达量无统计学意义(P＞0.05)。
　　 3、蛋白质印迹法即(WesternBlot)结果
　　 两实验组患者的子宫内膜LPAR3和HOXA11mRNA蛋白表达量大于对照组(LPAR3蛋白表达量分别为0.971±0.125，0.992±0.0508，0.793±0.1230，P＜0.05:HOXA11蛋白表达量分别为0.909±0.080，0.947±0.283，0.800±0.433，P＜0.05)，差异有统计学意义，但是两组实验组组间的表达量无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1.子宫内膜搔刮术和中成药两种干预措施可以使着床窗期子宫内膜中LPAR3和HOXA11mRNA和蛋白表达增强。
　　 2.子宫内膜搔刮术和中成药两种干预措施均可以改善子宫内膜容受性，提高妊娠率。

目录

声明

摘要

中英文缩略词汇对照表

1 引言

2 材料

3 方法

4 结果

5 讨论

6 结论

参考文献

附图

综述

附录

知情同意书

个人简历及在学期间发表的论文和研究成果

致谢