Runt相关转录因子-2在肝癌细胞化疗耐药中的机制研究

摘要

研究背景:
　　肝细胞肝癌的发生率在所有肿瘤中排在第五位，而其死亡率则高居第三位。在中国，每年有超过500，000例的新增肝癌患者，其恶性程度高，预后差。多柔比星是一种临床上常见的化疗药，然而，其对于肝细胞肝癌病人的客观有效率却不到20％，并且同其他化疗药物相比，单用多柔比星并未使病人的生存时间得到显著延长。造成这一现象的重要原因之一即是肝癌化疗耐药，而上皮间质化可能是到这这一现象的的重要原因之一。Runx2又称为cbfα1或AML3，是参与调控成骨细胞分化的关键转录因子，近来很多研究均报道Runx2同骨肉瘤、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌以及甲状腺癌等恶性肿瘤发生及化疗耐药相关。虽然目前尚无在肝癌中的研究，但是在前列腺癌、乳腺癌和甲状腺癌中已经有学者发现了Runx2的高表达可能导致肿瘤细胞发生上皮间质化，并且肝细胞肝癌因发生上皮间质化而导致化疗耐药也已得到了大量的证实。
　　实验目的:
　　研究Runx2在肝细胞肝癌中的表达及其同化疗耐药之间的关系，并在此基础上探讨同上皮间质化机制关系。
　　实验方法:
　　将2012年1月至2013年1月间在郑州大学第一附属医院治疗的62名肝癌患者作为研究对象，通过免疫组织化学方法检测标本中Runx2表达水平。体外实验中以Hep3B、HepG2、Huh-7和SNU-449肝癌细胞系作为研究对象，通过细胞增殖检测、Westernblotting和划痕愈合实验，结合siRNA干扰技术，检测Runx2干扰前后各细胞系对于多柔比星化疗敏感性以及上皮间质表型变化，从而探讨其中机制。
　　实验结果:
　　在62例肝癌患者肿瘤标本中，Runx2阳性表达者占75.81％，有肝外转移者中阳性和强阳性比例分别为33.87％和24.19％;化疗耐药者中阳性和强阳性比例分别为52.38％和38.10％;而对化疗敏感者，Runx2检测呈强阳性的仅9.38％，阳性和弱阳性者分别占25.00％和43.75％，而阴性者则有21.87％。体外研究发现，Runx2表达高的肝癌细胞SNU-449对多柔比星耐药，而Runx2表达最少的Hep3B细胞对多柔比星最为敏感，Runx2表达水平居中的HepG2和Huh-7细胞对多柔比星的化疗敏感性也居中。当Runx2表达受到抑制后，四个细胞系对多柔比星的化疗敏感性均有不同程度的增加，且结果均有统计学差异。进一步研究结果发现Runx2表达高的SNU-449细胞为间质表型，Runx2低表达的Hep3B细胞为上皮表型，而Runx2表达水平介于SNU-449和Hep3B之间的HepG2和Huh-7细胞则兼具上皮表型和间质表型特征。此外，我们还发现上皮表型的细胞对多柔比星化疗敏感，而间质表型的SNU-449细胞则表现出对多柔比星的耐药。而当间质特性被减弱后，肿瘤细胞对化疗的敏感性增强。而Runx2可以参与调控肝癌细胞的上皮间质化进程，抑制Runx2的表达可以降低间质特性、增强上皮特性，并且通过调控上皮间质化从而进一步调控肿瘤细胞对多柔比星的化疗效果。
　　结论:
　　本研究证明了肝癌细胞中高表达的Runx2可能会引起肿瘤细胞的上皮间质化，并进一步引起肿瘤细胞对化疗药物（多柔比星）的耐药及复发、转移。而通过Runx2siRNA转染干扰细胞中Runx2的表达可以扭转或阻止肝癌细胞上皮间质化的发生，增强对化疗药物的敏感性，并降低肿瘤细胞转移能力。

目录

声明

摘要

1．前言

2．材料和方法

2．1 材料

2．2 方法

3．结果

3．1 Runx2表达水平同肝癌类型之间的相关性

3．2 Runx2表达高的肝细胞肝癌细胞系对多柔比星耐药

3．3 Runx2表达抑制后可增强多柔比星化疗敏感性

3．4 上皮表型的肝癌细胞对与多柔比星较间质表型的肝癌细胞更为敏感

3．5 多柔比星可以诱导肝癌细胞系发生上皮间质化改变

3．6 Runx2参与调节肝癌细胞的上皮间质化

3．7 Runx2通过调控上皮问质化从而部分增强肝癌细胞对多柔比星化疗的敏感性

4．讨论

5．结论

参考文献

综述 Runx2的研究进展

个人简历及攻读硕士期间发表的学术论文情况

致谢